HSP27mRNA、HSP70mRNA在培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、目的：通過觀察高溫氧化作用對(duì)人晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)熱休克蛋白質(zhì)(HSP)表達(dá)的影響，來探討白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制，試圖證明HSP27、HSP70可能參與了對(duì)晶狀體的保護(hù)作用。 方法：人HLB-C3細(xì)胞系(由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院的眼科學(xué)系提供)含15％的小牛血清在DMEM37℃培養(yǎng)箱里培育。培育后的晶狀體細(xì)胞分為對(duì)照組和兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組(Ⅰ、Ⅱ)，實(shí)驗(yàn)組Ⅰ在高溫(45℃)條件下培養(yǎng)30分鐘后，于不同時(shí)間段(0h，2h，4h，6h，16h，24

2、h)采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)HSP27mRNA、HSP70mRNA的水平，實(shí)驗(yàn)組Ⅱ在氧化(50mmol/LH2O2)條件培養(yǎng)30分鐘后，恢復(fù)至正常條件下，在生物介質(zhì)中恢復(fù)于不同時(shí)間段(0h，2h，4h，6h，16h，24h)，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)HSP27mRNA、HSP70mRNA的水平，對(duì)照組于不同時(shí)間段(0h，2h，4h，6h，16h，24h)，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)HS

3、P27mRNA、HSP70mRNA的水平，以β-actin作為內(nèi)參校正，并對(duì)獲得的指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：生理狀態(tài)下和高溫、氧化狀態(tài)下均有熱休克蛋白質(zhì)的表達(dá)，高溫應(yīng)激和氧化應(yīng)激后2小時(shí)導(dǎo)致HSPmRNA的水平增加。統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)HSP27、HSP70高溫組和氧化組的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，有顯著性差異(p＜0.05)。并且每組HSP27mRNA、HSP70mRNA的表達(dá)到達(dá)峰值的時(shí)間間隔從2h到6h不等。以后逐漸降低，但是他們?nèi)?/p>