大黃素對TLR4基因介導的腎小管上皮細胞LPS信號轉(zhuǎn)導的機理研究.pdf

1、目的:觀察在脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）誘導下，腎小管上皮細胞對天然免疫Toll樣受體4（Toll-like receptor4 TLR4）和信號轉(zhuǎn)導分子髓樣分化因子88（Myeloid differentiation factor88,MyD88）、核轉(zhuǎn)錄因子κB( Nuclear factor－kappa B,NF-κB)以及下游產(chǎn)物白細胞介素6（Interleukin－6，IL-6）、腫瘤壞死因子α(Tu

2、mor necrosis factorα，TNFα)的反應，闡述在腎固有細胞中存在與其它炎癥細胞相同的信號轉(zhuǎn)導途徑，進一步證實腎固有細胞參與腎臟免疫過程；同時探討大黃素在上述環(huán)節(jié)中的作用及途徑。
　　方法:原代培養(yǎng)的BALB/C小鼠腎小管上皮細胞，模型組用100ng/ml的LPS誘導，治療組在LPS誘導的同時，分別用0.1、0.2、0.4μg/ml濃度的大黃素干預，于24h后分別提取細胞總RNA及蛋白，用逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應（Re

3、verse transcription-polymerase chain reaction，PT-PCR）檢測TLR4、MyD88、NF-ΚB以及TNFα、IL-6 mRNA的表達，并用免疫蛋白印跡（Western-blotting）檢測腎小管上皮細胞NF-κB蛋白的表達。
　　結果:正常腎小管上皮細胞可見TLR4、MyD88、NF-κB以及TNFα、IL-6 mRNA低表達，用LPS刺激后，各因子表達均明顯上調(diào)（與正常組比，P<

4、0.05）,不同濃度大黃素干預后則TLR4、MyD88、NF-κB以及TNFα、IL-6 mRNA表達均明顯下降（與模型組比較，P<0.05），下降程度與大黃素濃度相關，部分存在一定的量效依賴關系；Western-blotting法顯示LPS誘導后，轉(zhuǎn)入核內(nèi)的NF-κB明顯增加（P<0.01），而大黃素干預后則活性NF-κB顯著減少（P<0.05）。
　　結論:腎小管上皮細胞本身能夠表達TLR4、MyD88、NF-ΚB以及TNFα