轉染GFP人羊膜上皮細胞側腦室移植治療偏側帕金森病大鼠模型的實驗研究.pdf

1、目的： (1)觀察人羊膜上皮細胞正常大鼠側腦室移植后的存活情況； (2)觀察人羊膜上皮細胞帕金森病(PD)大鼠模型側腦室移植后的存活及分化情況，以及它對阿樸嗎啡引起的PD大鼠旋轉行為、黑質區(qū)多巴胺能神經元、紋狀體區(qū)單胺類神經遞質的影響。 方法： (1)細胞移植兩周后免疫組織化學法檢測人羊膜上皮細胞Oct-4和Nanog的表達情況； (2)采用6-羥多巴立體定向紋狀體內注射制作偏側PD大鼠模型，將制

2、模成功大鼠隨機分成兩組：人羊膜上皮細胞(HAECs)組、NS組，另取正常大鼠作正常對照組。HAECs組側腦室注射轉染綠色熒光蛋白(GFP)的人羊膜上皮細胞，NS組側腦室注射NS，正常對照組不做任何處理。1周后腹腔注射阿樸嗎啡觀察HAECs組和NS組大鼠旋轉行為的變化，連續(xù)觀察10周；在細胞移植后的第1、4、7、10周分別記錄HAECs組和NS組大鼠體重；HAECs組大鼠細胞移植5周后免疫熒光電鏡觀察人羊膜上皮細胞GFP的表達情況；10周

3、后TH染色觀察HAECs組、NS組和正常對照組大鼠黑質區(qū)TH陽性神經元的變化情況以及側腦室內人羊膜上皮細胞的分化情況；高效液相色譜法(HPLC)測定HAECs組、NS組和正常對照組大鼠紋狀體多巴胺(DA)及其代謝產物3，4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)以及腦脊液中多巴胺的水平。 結果： (1)人羊膜上皮細胞正常大鼠側腦室移植二周后表達Oct-4和Nanog； (2)從移植后第二周開始，HAECs

4、組PD大鼠旋轉圈數(shù)較NS組明顯降低(均P<0.01)；細胞移植后的第1、4、7、10周HAECs組和NS組大鼠體重無明顯差異(均P>0.05)；細胞移植后5周，可見側腦室內人羊膜上皮細胞表達GFP； HAECs組黑質區(qū)TH陽性神經元數(shù)量較NS組升高(P<0.01)，HAECs組、NS組黑質區(qū)TH陽性神經元數(shù)比正常對照組低(P<0.01)； HAECs組大鼠紋狀體區(qū)DA及其代謝產物DOPAC含量較NS組明顯升高(P<0.05)，HVA也較

5、NS組顯著升高(P<0.01)，HAECs組腦脊液中DA含量較NS組顯著升高(P<0.01)，HAECs組、NS組紋狀體DA、DOPAC、HVA及腦脊液中DA含量比正常對照組低(P<0.05)。 結論： (1)人羊膜上皮細胞正常大鼠側腦室移植二周后可以存活并保持干細胞性質； (2)人羊膜上皮細胞PD大鼠側腦室移植可以改善PD大鼠的癥狀，其機制可能與人羊膜上皮細胞釋放的神經營養(yǎng)因子減少了6-OHDA對黑質區(qū)DA能神