帕金森病慢性猴模型自體頸動脈體細胞移植治療實驗研究.pdf

1、第一部分：慢性帕金森病MPTP猴模型的研究 目的：應用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-吡啶(MPTP)，在健康恒河猴中誘發(fā)出穩(wěn)定的慢性帕金森病(PD)樣癥狀，模擬人類PD的演變過程。 方法：通過慢性皮下注射的方法，對4只雄性成年恒河猴進行MPTP處理(0.1mg/kg1次/日)，采用PD猴模型修正評分量表(PPRS)對實驗動物進行行為學評分。評分達到8分視為癥狀出現(xiàn)，至癥狀穩(wěn)定后停止使用MPTP。在模型制備過程中，以

2、一周為間隔連續(xù)進行血紅蛋白、紅細胞、白細胞、GOT、GPT、BUN、Cr、BS的檢測，評價模型的機能狀態(tài)。 結果：4只動物均成功復制出雙側穩(wěn)定的PD樣癥狀，癥狀出現(xiàn)的時間為(18.3±1.3天)，最終達到穩(wěn)定狀態(tài)(26.3±1.3天)；經(jīng)過1月連續(xù)觀察，無行為學恢復現(xiàn)象出現(xiàn)；對左旋多巴治療有明顯的反應。所有動物除白細胞在模型制備過程中出現(xiàn)漸進性升高，最后與正常比較出現(xiàn)顯著性差異(p＜0.01)，其余指標均無明顯差異(p＞0.01

3、)。 結論：慢性MPTP猴模型能夠在行為學上良好模擬人類PD的特征性、慢性變化過程；在模型形成過程中動物的機能狀態(tài)無明顯變化，可以作為研究模型應用于PD的治療研究。 第二部分：帕金森病慢性猴模型自體頸動脈體細胞團塊紋狀體內移植治療的療效評價 目的：評價MPTP慢性帕金森病猴模型自體頸動脈體細胞團塊紋狀體內移植后的治療效果。 方法：4只按非人類靈長類帕金森病評分量表(PPRS)評價，行為學癥狀持續(xù)穩(wěn)定1月的

4、慢性PDMPTP猴模型，應用MRI(GESigna1.5TNV/i)進行移植術前定位，取一側的自體頸動脈體細胞團塊，使用Leksell立體導向系統(tǒng)(GM695)行紋狀體區(qū)立體定向移植術。按PPRS標準進行移植后行為學評分，并采用阿樸嗎啡注射誘發(fā)旋轉的方法觀察治療效果；術后3月深度麻醉下取出雙側SN區(qū)域腦組織性酪氨酸羥化酶(Tyrosinehydroxylase，TH)組織化學研究；應用高效液相色譜(HPLC)測定雙側SN、紋狀體區(qū)域腦組

5、織Glu、GABA、Asp、Gsy和多巴胺及代謝產物的變化。 結果：移植后動物開始出現(xiàn)進展性移植對側行為學改善，4周后行為學評分與移植前比較出現(xiàn)顯著性差異(p＜0.01)；阿樸嗎啡注射后動物出現(xiàn)朝向移植側的旋轉行為。移植側黑質TH陽性細胞數(shù)明顯增加，與對照側比較具有顯著性差異(p＜0.01)。移植側黑質和紋狀體區(qū)域腦組織DA及其代謝產物水平明顯升高，與對照側比較差異具有極顯著性意義(p＜0.01)；Glu、GABA水平顯著下降，

6、差異具有極顯著性意義(p＜0.01)；Asp和Gsy雙側比較差異無顯著性意義(p＞0.05)。 結論：自體頸動脈體細胞團塊紋狀體內移植能夠改善PD猴的行為學；增加移植區(qū)域細胞存活率；提高移植區(qū)域DA及其代謝產物水平，降低Glu和GABA含量，可能成為治療PD的一種有效方法。 第三部分:慢性帕金森病MPTP猴模型自體頸動脈體細胞團塊紋狀體移植術后1H-MRS研究 目的：應用質子磁共振波譜(1H-MRS)技術，進行慢

7、性帕金森病(PD)1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)猴模型自體頸動脈體(CB)細胞紋狀體區(qū)移植術后生化代謝物的檢測，評價細胞結構生存能力。 方法：4只按非人類靈長類帕金森病評分量表(PPRS)評價，行為學癥狀持續(xù)穩(wěn)定1月的慢性PDMPTP雄性猴模型，應用MRI(GESigna1.5TNV/i)進行移植術前定位，取一側的自體CB，使用Leksell立體導向系統(tǒng)(Leksell，GM952)行紋狀體區(qū)立體定向移

8、植術。于移植術后8周內按PPRS標準進行移植后行為學評分；每2周對雙側紋狀體區(qū)行質子磁共振波譜采集，觀察大腦主要代謝物氮-乙酰天冬氨酸(NAA)，膽堿化合物(Cho)，肌酸及磷酸肌酸(Cr)，采用隨機軟件FuncTool4.0對大腦代謝物含量進行半定量化分析，觀察NAA/Cr和Cho/Cr的變化，以配對的t檢驗行統(tǒng)計學分析，并與行為學評分進行對照分析。 結果：與未移植側紋狀體區(qū)比較，移植術4周后，移植側紋狀體區(qū)NAA/Cr逐漸增

9、高，Cho/Cr逐漸下降，移植術后6周自體雙側出現(xiàn)顯著性差異(p＜0.05)。 結論：1H-MRS顯示出慢性PDMPTP猴模型移植區(qū)域的代謝及生化改變，表明自體CB細胞移植可能產生局部多巴胺神經(jīng)元的生長，進而可以作為有效手段應用于PD的治療。 第四部分：帕金森病慢性MPTP猴模型自體頸動脈體細胞團塊紋狀體移植后抗氧化作用的研究 目的：進行慢性帕金森病(PD)MPTP猴模型自體頸動脈體細胞紋狀體移植后抗氧化作用的研

10、究，探討移植產生作用的機制。 方法：4只按非人類靈長類帕金森病評分量表(PPRS)評價，行為學癥狀持續(xù)穩(wěn)定1月的慢性PDMPTP猴模型，應用MRI(GESigna1.5TNV/i)進行移植術前定位，取一側的自體頸動脈體細胞團塊，使用Leksell立體導向系統(tǒng)(Leksell，GM695)行紋狀體區(qū)立體定向移植術。手術后3月深度麻醉后取雙側紋狀體及SN區(qū)域腦組織進行總抗氧化能力(Totalantioxidantcapacity，T

11、-AOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧歧化酶(SOD)活性和脂質過氧化物質丙二醛(MDA)含量的測定。以配對的t檢驗行統(tǒng)計學分析，進行雙側比較。 結果：與對照側比較，移植側紋狀體和黑質腦組織T-AOC指數(shù)和GSH-Px活性顯著升高，差異具有顯著性意義(p＜0.01)；SOD活性顯著下降，MDA含量顯著下降，差異具有顯著性意義(p＜0.01)。 結論：PDMPTP猴模型自體頸動脈體細胞紋狀體移植后，能夠顯著提

12、高腦組織抗氧化能力；通過抗氧化應激作用的增加實現(xiàn)神經(jīng)保護，可能是發(fā)生作用的重要機制。 第五部分：帕金森病慢性猴模型自體頸動脈體團快紋狀體移植后GDNFmRNA的表達和蛋白質的變化 目的：探討帕金森病慢性猴模型自體頸動脈體團快紋狀體移植后GDNFmRNA的表達和蛋白質的變化。 方法：4只按非人類靈長類帕金森病評分量表(PPRS)評價，行為學癥狀持續(xù)穩(wěn)定1月的慢性PDMPTP猴模型，應用MRI(GESigna1.5T

13、NV/i)進行移植術前定位，取一側的自體頸動脈體細胞團塊，使用Leksell立體導向系統(tǒng)(Leksell，GM695)行紋狀體區(qū)立體定向移植術。手術后3月分別提取紋狀體、SN區(qū)域RNA進行RT-PCR，比較兩側膠質細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)mRNA表達的變化；采用Westernblot印記法檢測紋狀體、SN區(qū)域GDNF蛋白質表達變化。 結果：與對照測比較，移植側紋狀體和黑質區(qū)域GDNFmRNA表達顯著增高，差異具有極顯著性