MPTP慢性帕金森病小鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.觀察神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methyl4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)小劑量長(zhǎng)期注射誘導(dǎo)的帕金森病(Parkinson’s disease，PD)小鼠模型，腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目減少和細(xì)胞凋亡情況。2.觀察神經(jīng)毒素1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyrid

2、ine，MPTP)小劑量長(zhǎng)期注射誘導(dǎo)的慢性帕金森病(Parkinson’s disease，PD)小鼠模型，腦黑質(zhì)部α-突觸核蛋白的表達(dá)改變和異常聚集的情況。 方法：本研究采用MPTP小劑量長(zhǎng)期注射誘導(dǎo)慢性帕金森病小鼠(C57BL)模型，設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和正常對(duì)照組，每組各40只小鼠，實(shí)驗(yàn)組給予MPTP背部皮下注射，對(duì)照組給予生理鹽水背部皮下注射。注射完畢后于不同時(shí)間點(diǎn)，觀察各組小鼠是否出現(xiàn)類帕金森病癥狀，在形態(tài)學(xué)上采用HE染色觀察黑

3、質(zhì)細(xì)胞丟失情況，采用SP免疫組織化學(xué)法檢測(cè)酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)和α-突觸核蛋白的表達(dá)；采用原位末端標(biāo)記法(TUNEL法)檢測(cè)黑質(zhì)多巴胺細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。 結(jié)果：1.行為學(xué)觀察結(jié)果：與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組小鼠爬桿時(shí)間延長(zhǎng)有明顯差異(p<0.05)，且出現(xiàn)震顫、豎毛、前腿抬高、豎尾、動(dòng)作緩慢和減少等異常行為，對(duì)照組未出現(xiàn)帕金森病樣異常行為。2.形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果：HE 染色法染色后，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較

4、黑質(zhì)區(qū)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量減少，丟失明顯。3.SP免疫組織化學(xué)法結(jié)果：在處理完畢后第1天，第3周，第2月，第6月，實(shí)驗(yàn)組小鼠中腦黑質(zhì)部TH免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯減少，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(CPC)較對(duì)照組均有顯著差異(p<0.05)。注射完畢后各時(shí)間段，實(shí)驗(yàn)組小鼠TH表達(dá)有所變化，注射完畢后第1天TH陽(yáng)性染色細(xì)胞減少最多，至第3周后逐漸開始回升，直至第6月時(shí)仍較對(duì)照組陽(yáng)性染色少。4.TUNEL法結(jié)果：在處理完畢后第1天、第3周、第2月、

5、第6月，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組均有較多染色為棕黃色的凋亡細(xì)胞，主要集中在中腦黑質(zhì)區(qū)。而對(duì)照組偶見凋亡細(xì)胞。5、α-突觸核蛋白免疫組織化學(xué)法結(jié)果：在注射完畢后第1天、第3周、第2月、第6月，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組黑質(zhì)部α-突觸核蛋白陽(yáng)性染色增多，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多，具有顯著差異(p<0.05)。實(shí)驗(yàn)組處理完畢后各階段α-突觸核蛋白陽(yáng)性表達(dá)增加，并在黑質(zhì)細(xì)胞內(nèi)異常聚集。α-突觸核蛋白，在處理完畢后第1天就開始出現(xiàn)，至第3周表達(dá)最多，隨后稍有減少，但仍高于第1天，并

6、可持續(xù)表達(dá)至第6月。 結(jié)論：1、MPTP誘導(dǎo)C57BL小鼠出現(xiàn)類帕金森病癥狀；病理改變上出現(xiàn)中腦黑質(zhì)部多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目減少及細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，其發(fā)病呈慢性進(jìn)行性的過(guò)程。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：MPTP慢性帕金森病模型中，細(xì)胞凋亡參于了PD的發(fā)病機(jī)制。MPTP慢性帕金森病模型是更能代表臨床帕金森病自然病程的動(dòng)物模型。2、慢性長(zhǎng)期注射MPTP誘導(dǎo)的帕金森病小鼠模型，腦黑質(zhì)部α-突觸核蛋白持續(xù)性表達(dá)增多，并出現(xiàn)異常聚集；α-突觸核蛋白表達(dá)的時(shí)間可