PDGF-h-α-Synuclein轉(zhuǎn)基因帕金森病小鼠模型的建立.pdf

1、帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一種年齡相關(guān)的慢性進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，靜止性震顫、強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)徐緩、步態(tài)不穩(wěn)等是其主要的臨床特征，現(xiàn)在已成為威脅老年人健康的主要疾病之一。帕金森病主要病理特征表現(xiàn)為黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)元變性和缺失，細(xì)胞內(nèi)包含體-路易小體(Lewy body，LB)的形成。α-Synuclein是帕金森病特征性病變路易小體的主要成分，在帕金森的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。生理?xiàng)l件下，它可調(diào)節(jié)突觸血管的

2、再生和重塑，同時(shí)在脂質(zhì)代謝，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)等方面也有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)早發(fā)型家族遺傳性帕金森病患者出現(xiàn)α-synuclein基因的錯(cuò)義突變A53T和A30P，及野生型二倍體表達(dá)增多。突變的α-synuclein可促進(jìn)自身寡聚物的形成，增加其神經(jīng)毒性。但是，突變及過量表達(dá)的α-synuclein究竟是通過何種分子機(jī)制促進(jìn)了PD的發(fā)生至今仍不清楚。因此建立α-synuclein轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型可為今后帕金森病的研究提供有力的模型基礎(chǔ)。

3、 為了更好的研究α-synuclein在PD發(fā)病過程中的作用，本實(shí)驗(yàn)采用神經(jīng)特異性啟動(dòng)子PDGF，建立了在神經(jīng)系統(tǒng)特異性表達(dá)人α-svnuclein野生型及兩個(gè)突變型A53T和A30P的轉(zhuǎn)基因小鼠。構(gòu)建人α-synuclein表達(dá)載體，利用顯微注射法制備人α-synuclein基因的轉(zhuǎn)基因小鼠。通過PCR方法鑒定轉(zhuǎn)基因首建鼠及其子代基因型。通過RT-PCR和Western blotting方法鑒定轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織中人α-synucl

4、ein mRNA和蛋白表達(dá)情況。得到表達(dá)水平不同的野生型人α-synuclein轉(zhuǎn)基因小鼠2個(gè)品系。得到表達(dá)水平不同的A53T突變型α-synuclein轉(zhuǎn)基因小鼠2個(gè)品系。得到表達(dá)水平不同的A30P突變型α-synuclein轉(zhuǎn)基因小鼠3個(gè)品系。采用免疫組化鑒定人α-synuclein在小鼠腦組織中的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因小鼠大腦海馬、新皮層、紋狀體區(qū)出現(xiàn)人α-synuclein陽性標(biāo)記的細(xì)胞。通過Rota rod實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)基