帕金森病轉(zhuǎn)基因小鼠血漿Ghrelin水平的變化及其機(jī)制探討.pdf

1、帕金森?。≒arkinson's disease，PD）是一種常見(jiàn)的中老年神經(jīng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為靜止性震顫、肌張力增高、運(yùn)動(dòng)遲緩等。雖然PD已有近二百年的研究歷史，迄今為止，由于PD的發(fā)病機(jī)制不明，因此，臨床上尚無(wú)有效的治愈PD的方法。根據(jù)Braak提出的PD腦內(nèi)病理進(jìn)展6級(jí)分級(jí)學(xué)說(shuō)，黑質(zhì)病變已經(jīng)是到達(dá)疾病病理階段的第三或第四階段，因此，臨床上，通過(guò)運(yùn)動(dòng)癥狀的改變?cè)\斷的PD病人已經(jīng)到達(dá)疾病的中晚期。如果能在早期診斷PD，即在運(yùn)動(dòng)癥狀

2、出現(xiàn)之前診斷PD，并采取適當(dāng)?shù)纳窠?jīng)保護(hù)治療方案，必將對(duì)延緩多巴胺能神經(jīng)元的進(jìn)一步退行性變和延緩疾病的進(jìn)展具有重要的意義。而研究已證實(shí)，對(duì)于散發(fā)性PD病人，在出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)癥狀之前，往往會(huì)出現(xiàn)一些非運(yùn)動(dòng)癥狀，如便秘、嗅覺(jué)喪失等癥狀。而PD中最先受累的核團(tuán)包括嗅球和迷走神經(jīng)背側(cè)運(yùn)動(dòng)核(dorsal motornucleus of vagus nerve，DMV)。DMV是調(diào)節(jié)胃腸道運(yùn)動(dòng)和分泌功能的最重要的中樞核團(tuán)之一，其病理改變可能是導(dǎo)致PD病人

3、出現(xiàn)上述的非運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)癥狀的原因之一。因此，如果能在血液中找到一種檢測(cè)指標(biāo)，間接反映腦內(nèi)核團(tuán)的早期病變，將對(duì)PD的早期診斷、早期治療和運(yùn)動(dòng)外癥狀的治療具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 Ghrelin是1999年由Kojima等人首先從大鼠胃黏膜細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的含28個(gè)氨基酸殘基的多肽，是生長(zhǎng)激素促分泌素受體唯一的內(nèi)源性配體，主要由胃底的X/A樣細(xì)胞分泌，ghrelin主要有兩種分子形式，即第三位絲氨酸辛酰化(activeghrelin)

4、和第三位絲氨酸非辛酰化ghrelin。除了胃腸道分泌外，在下丘腦、腸、腎等部位也有少量分泌，但循環(huán)系統(tǒng)的ghrelin大部分來(lái)源于胃，其表達(dá)調(diào)控受多種因素的影響，進(jìn)食、肥胖等因素都可通過(guò)中樞機(jī)制或旁分泌機(jī)制導(dǎo)致血液中g(shù)hrelin水平的變化。Ghrelin的合成和分泌主要受中樞神經(jīng)系統(tǒng)DMV的膽堿能神經(jīng)元支配，而DMV恰巧是PD早期受累的核團(tuán)之一，因此DMV的病變可能會(huì)影響血漿ghrelin的水平，而因此血漿ghrelin的水平可能會(huì)成

5、為PD中DMV神經(jīng)元功能損傷的外周標(biāo)記物。本研究在攜帶人突變型α-synuclein(A53T)轉(zhuǎn)基因小鼠及與其相對(duì)應(yīng)的野生型小鼠(WT)上，用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定不同年齡（1月齡，3月齡，6月齡，9月齡，12月齡）的雌雄鼠血漿中g(shù)hrelin的水平，并應(yīng)用尼氏染色法和免疫組織化學(xué)方法，分別觀察上述動(dòng)物延髓DMV神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元數(shù)量的變化，以期在這

6、種PD轉(zhuǎn)基因小鼠中，觀察疾病的不同進(jìn)展過(guò)程中血漿中g(shù)hrelin水平的變化，并分析引起這種變化的可能機(jī)制。結(jié)果如下:
　　 1.在3月齡，6月齡，9月齡PD轉(zhuǎn)基因雌鼠中，血漿的總ghrelin(total ghrelin)的水平分別降低了13％，22％和25％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而1月齡和12月齡的PD轉(zhuǎn)基因雌鼠，血漿total ghrelin的水平卻未觀察到變化。
　　 2.在3月齡，6月齡，9月齡PD轉(zhuǎn)

7、基因雄鼠中，血漿total ghrelin水平分別降低了18％，60％和23％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而1月齡和12月齡的PD轉(zhuǎn)基因雄鼠，血漿中total ghrelin水平卻未觀察到變化。
　　 3.在3月齡，6月齡，9月齡PD轉(zhuǎn)基因雌鼠中，血漿有活性的ghrelin(activeghrelin)的水平分別降低了24％，68％和32％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1月齡PD轉(zhuǎn)基因雌鼠血漿中active ghrel

8、in的水平升高了10％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。12月齡的PD轉(zhuǎn)基因雌鼠血漿中active ghrelin的水平未觀察到變化。
　　 4.在3月齡，6月齡，9月齡，12月齡PD轉(zhuǎn)基因雄鼠中，血漿active ghrelin的水平分別降低了28％，58％和39％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1月齡PD轉(zhuǎn)基因雄鼠血漿中active ghrelin的水平升高了21％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。12月齡PD轉(zhuǎn)基因雄鼠血

9、漿中active ghrelin的水平未觀察到變化。
　　 5.在9月齡PD轉(zhuǎn)基因雌鼠DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量分別減少了12.46％和12.30％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而3月齡，6月齡和12月齡PD轉(zhuǎn)基因雌鼠，DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量未觀察到變化，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在12月齡野生型雌鼠中，DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量比3月齡的分別減少了51.28％和22.63％，差別均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在1

10、2月齡PD轉(zhuǎn)基因雌鼠中，DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量比3月齡的分別減少了41.92％和34.89％，差別均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6.在6月齡PD轉(zhuǎn)基因雄鼠DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量分別減少了20.31％和4.06％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在9月齡PD轉(zhuǎn)基因雄鼠DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量分別減少了9.88％和11.06％，與對(duì)照組相比，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而3月齡和12月齡PD轉(zhuǎn)基因雄鼠DMV區(qū)神

11、經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量未觀察到變化，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在12月齡野生型雄鼠中，DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量比3月齡的分別減少了45.04％和18.03％，差別均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在12月齡PD轉(zhuǎn)基因雄鼠中，DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元的數(shù)量比3月齡的分別減少了52.50％和24.88％，差別均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 上述結(jié)果表明，在PD疾病早期，即可觀察到血漿ghrelin水平的下降，且伴有腦內(nèi)延髓DMV區(qū)神經(jīng)元和膽堿