焦慮預(yù)處理對(duì)急性帕金森病小鼠模型的影響.pdf

1、目的：帕金森病(Parkinson's disease，PD)是中老年常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，主要臨床表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)弛緩、震顫、強(qiáng)直、姿勢(shì)平衡障礙等運(yùn)動(dòng)癥狀，此外，常伴發(fā)焦慮、抑郁、睡眠障礙、便秘、認(rèn)知功能減退等非運(yùn)動(dòng)癥狀，其中，焦慮對(duì)PD患者的病情發(fā)展、生活質(zhì)量、預(yù)后都有很大的影響，但是到目前為止對(duì)有引起焦慮事件預(yù)刺激的PD患者，各方面的改變了解甚少。因此，本實(shí)驗(yàn)采用C57BL/6J小鼠建立四種實(shí)驗(yàn)分組：空白對(duì)照組、焦慮預(yù)處理模型、急

2、性PD模型、焦慮預(yù)處理的急性PD模型，旨在探討焦慮預(yù)處理對(duì)急性PD小鼠模型情緒、運(yùn)動(dòng)功能、學(xué)習(xí)記憶功能以及黑質(zhì)-紋狀體多巴胺能神經(jīng)元的影響。
　　方法：
　　將68只13周齡23～30g C57BL/6J健康雄性小鼠隨機(jī)分為以下4組(n=17)：
　　(1)正常組(CON組)：正常健康小鼠，不做任何處理；
　　(2)焦慮預(yù)處理組(ANX組)：采用改良Vogel飲水沖突法結(jié)合束縛方法預(yù)處理的小鼠模型；
　　(

3、3)急性PD模型組(PD組)：采用腹腔注射MPTP制造急性PD模型；
　　(4)焦慮預(yù)處理的急性PD模型組(ANX+PD組)：在焦慮預(yù)處理后第3天給予小鼠MPTP藥物，用于制造先有焦慮情緒后患PD的小鼠模型。
　　各組小鼠在相同環(huán)境下飼養(yǎng)，焦慮預(yù)處理后第5，6，7和8-13天依次分別行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，爬桿試驗(yàn)，水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠行為學(xué)改變，焦慮預(yù)處理后第14天取各組小鼠大腦，采用免疫組織化學(xué)觀察黑質(zhì)-紋狀體酪氨酸

4、羥化酶陽(yáng)性(tyrosine hydroxylase positive，TH+)神經(jīng)元的改變。
　　結(jié)果：
　　1焦慮預(yù)處理對(duì)小鼠的影響
　　1.1焦慮預(yù)處理對(duì)小鼠情緒的影響
　　焦慮預(yù)處理后第2天行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組比較，ANX組開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)占總進(jìn)臂次數(shù)百分比(OE％)和開(kāi)臂滯留時(shí)間占總進(jìn)臂時(shí)間百分比(OT%)均顯著減少(P<0.05)。表明小鼠存在焦慮情緒，焦慮預(yù)處理成功。
　　焦慮

5、預(yù)處理后第5天行礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組比較，ANX組路程百分比、時(shí)間百分比、穿格次數(shù)百分比和總穿格次數(shù)均有一定程度的減少，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明小鼠無(wú)焦慮、抑郁情緒。
　　焦慮造模后第6天再次行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組比較，ANX組OE%、OT%差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　1.2焦慮預(yù)處理對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)功能的影響
　　焦慮預(yù)處理后第7天行爬桿實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組

6、比較，ANX組爬桿時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　1.3焦慮預(yù)處理對(duì)小鼠學(xué)習(xí)、記憶能力的影響
　　焦慮預(yù)處理后第8-13天行水迷宮實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：在定向航行實(shí)驗(yàn)階段，各組小鼠定向航行5 d的尋臺(tái)潛伏期逐漸縮短。與CON組比較， ANX組尋臺(tái)潛伏期顯著縮短(P<0.05)。在空間搜索實(shí)驗(yàn)階段，與CON組比較，ANX組小鼠運(yùn)動(dòng)路程、滯留時(shí)間、穿臺(tái)次數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　1.4焦慮預(yù)處理對(duì)小

7、鼠黑質(zhì)-紋狀體TH+神經(jīng)元的影響
　　1.4.1黑質(zhì)TH+神經(jīng)元的改變
　　焦慮預(yù)處理后第14天行TH免疫組織化學(xué)染色，結(jié)果顯示：ANX組與CON組小鼠黑質(zhì)TH+神經(jīng)元形態(tài)一致，神經(jīng)元排列致密、整齊，胞核飽滿，核仁清晰，平均每200倍視野陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　1.4.2紋狀體TH+神經(jīng)元平均光密度(Mean Optical Density，MOD)的改變
　　與 CON組比較， AN

8、X組紋狀體 TH+神經(jīng)元的 MOD顯著減少(P<0.05)。
　　2 MPTP制造急性PD模型對(duì)小鼠的影響
　　2.1 MPTP制造急性PD模型對(duì)小鼠情緒的影響
　　MPTP注射前1天行高架十字迷宮，結(jié)果顯示：與CON組比較，PD組OE%和OT%差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與ANX組比較，PD組OE%和OT%均顯著增多(P<0.05)。
　　MPTP注射后第3天行礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組和ANX組比較

9、，PD組路程百分比、時(shí)間百分比、穿格次數(shù)百分比和總穿格次數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　注射MPTP后第4天行高架十字迷宮，實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與CON組和ANX組比較，PD組OE%和OT%的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.2 MPTP制造急性PD模型對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)功能的影響
　　MPTP注射后數(shù)分鐘內(nèi)小鼠出現(xiàn)震顫、弓背、豎尾、豎毛、后肢張開(kāi)、步態(tài)不穩(wěn)，呼吸急促，且隨著給藥次數(shù)的增加，其行為學(xué)出現(xiàn)時(shí)間越來(lái)越

10、快，越來(lái)越明顯。這些癥狀常在半小時(shí)內(nèi)緩解，在24小時(shí)內(nèi)基本恢復(fù)。MPTP注射后第5天行爬桿實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組和ANX組比較， PD組小鼠爬桿時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.3 MPTP制造急性PD模型對(duì)小鼠學(xué)習(xí)、記憶能力的影響
　　MPTP注射后第6-11天行水迷宮實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組和ANX組比較，PD組在定向航行實(shí)驗(yàn)階段的尋臺(tái)潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.05)，且在空間搜索實(shí)驗(yàn)階段的運(yùn)動(dòng)路程、滯

11、留時(shí)間、穿臺(tái)次數(shù)均顯著減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.4 MPTP制造急性PD模型對(duì)小鼠黑質(zhì)-紋狀體TH+神經(jīng)元的影響
　　2.4.1黑質(zhì)TH+神經(jīng)元的改變
　　MPTP注射后第12天行TH免疫組織化學(xué)染色，結(jié)果顯示：PD組小鼠黑質(zhì)殘留TH+神經(jīng)元皺縮，不飽滿，梭形改變，突起減少。與CON組和ANX組比較，PD組平均每200倍視野TH+神經(jīng)元數(shù)較CON組下降49.70%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0

12、5)。
　　2.4.2紋狀體TH+神經(jīng)元MOD的改變
　　與CON組和ANX組比較，PD組紋狀體TH+神經(jīng)元的MOD降至CON組水平的69.90%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3焦慮預(yù)處理對(duì)急性PD小鼠模型的影響
　　3.1焦慮預(yù)處理對(duì)急性PD小鼠模型情緒的影響
　　焦慮預(yù)處理后第2天行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組和PD組比較，ANX+PD組OE%和OT%均顯著減少(P<0.05)。與

13、ANX組比較，ANX+PD組OE%和OT%差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明ANX+PD組小鼠同ANX組小鼠一樣，均存在明顯的焦慮情緒，焦慮預(yù)處理成功。
　　焦慮預(yù)處理后第5天行礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與 CON組、ANX組和 PD組比較，ANX+PD組路程百分比、時(shí)間百分比、穿格次數(shù)百分比和總穿格次數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　焦慮造模后第6天再次行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與CON組、ANX組和 PD組

14、比較，ANX+PD組 OE%和 OT%差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.2焦慮預(yù)處理對(duì)急性PD小鼠模型運(yùn)動(dòng)功能的影響
　　焦慮預(yù)處理后第7天行爬桿實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：與 CON組、ANX組和PD組比較，ANX+PD組爬桿時(shí)間均顯著增加(P<0.05)。
　　3.3焦慮預(yù)處理對(duì)急性PD小鼠模型學(xué)習(xí)、記憶能力的影響
　　焦慮預(yù)處理后第8-13天行水迷宮實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：在定向航行實(shí)驗(yàn)階段，與 CON組和 ANX

15、組比較，ANX+PD組尋臺(tái)潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.05)。與 PD組比較， ANX+PD組尋臺(tái)潛伏期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在空間搜索實(shí)驗(yàn)階段，與CON組和ANX組比較， ANX+PD組運(yùn)動(dòng)路程、滯留時(shí)間、穿臺(tái)次數(shù)均顯著減少(P<0.05)。與PD組比較， ANX+PD組運(yùn)動(dòng)路程、滯留時(shí)間、穿臺(tái)次數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3.4焦慮預(yù)處理對(duì)急性PD小鼠模型黑質(zhì)-紋狀體TH+神經(jīng)元的影響
　　3.4.1黑質(zhì)TH

16、+神經(jīng)元的改變
　　焦慮預(yù)處理后第14天行TH免疫組織化學(xué)染色，結(jié)果顯示：ANX+PD組小鼠黑質(zhì)殘留 TH+神經(jīng)元皺縮，不飽滿，梭形改變，突起減少，平均每200倍視野陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)較CON組下降49.40%。與CON組和ANX組比較，ANX+PD組黑質(zhì)TH+神經(jīng)元數(shù)均顯著減少(P<0.05)。與PD組比較，ANX+PD組黑質(zhì)TH+神經(jīng)元數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.4.2紋狀體TH+神經(jīng)元MOD的改變
　

17、　與 CON組和 ANX組比較，ANX+PD組紋狀體 TH+神經(jīng)元的 MOD降至CON組水平的69.42%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與PD組比較， ANX+PD組紋狀體TH+神經(jīng)元的MOD有一定程度下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1焦慮預(yù)處理可使小鼠產(chǎn)生明顯的焦慮情緒，但維持時(shí)間較短；可提高小鼠學(xué)習(xí)能力，損傷紋狀體多巴胺能神經(jīng)纖維，但對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)功能、記憶能力以及黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元無(wú)明顯影響