經(jīng)典Wnt信號(hào)通路失活在MPTP誘導(dǎo)的帕金森病模型中的作用研究.pdf

1、第一部分,MPTP所致小鼠帕金森病模型的建立
　　目的:MPTP是一種能引起神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變的化學(xué)毒素,是目前廣泛應(yīng)用制作動(dòng)物PD模型的工具藥。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察MPTP所致的小鼠帕金森病模型的行為學(xué)變化以及多巴胺能神經(jīng)元損傷。
　　方法:C57/BL6小鼠腹腔注射MPTP(30mg/kg),連續(xù)5d,制備帕金森病模型。另有LiCl(1mEq/kg)預(yù)處理7d后再給予MPTP組,及空白對(duì)照組。觀察造模前1d、造模過程1~5d、

2、造模后1~7d、14d和21d小鼠行為學(xué)的變化。造模后第7d采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的損傷情況。
　　結(jié)果:①給予MPTP后5~15min,小鼠均出現(xiàn)震顫、豎毛、豎尾等急性應(yīng)激反應(yīng)。爬桿行為學(xué)檢測(cè)顯示,給予MPTP后,小鼠爬桿時(shí)間明顯延長,差異顯著。停止給藥后,出現(xiàn)一定程度的恢復(fù),爬桿時(shí)間逐漸縮短,但始終高于空白對(duì)照組。LiCl預(yù)處理對(duì)小鼠爬桿行為障礙具有一定程度的改善作用。②與空白對(duì)照組相比,MPTP組黑質(zhì)致

3、密部TH陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯減少,LiCl預(yù)處理組的TH陽性神經(jīng)元數(shù)量有一定程度增加。
　　結(jié)論:在MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病亞急性模型中,出現(xiàn)典型的帕金森癥狀,同時(shí),TH陽性神經(jīng)元數(shù)目明顯減少,說明小鼠帕金森病模型制備成功。
　　第二部分,經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型中作用研究
　　目的:經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在動(dòng)物的生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用,經(jīng)典Wnt信號(hào)通路功能受到抑制會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元損傷。本

4、實(shí)驗(yàn)旨在研究經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型中的作用。
　　方法:①C57/BL6小鼠腹腔注射MPTP(30mg/kg),連續(xù)5d,制備帕金森病模型?？瞻讓?duì)照組給予等量生理鹽水。造模后0d(6h)、1d、2d、4d、7d、14d和21d分別取小鼠腹側(cè)中腦、紋狀體和大腦皮質(zhì),Westernblot檢測(cè)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路蛋白p-Ser9-GSK-3β、GSK-3β、β-catenin在不同時(shí)間點(diǎn)的變化情況。②C57/

5、BL6小鼠腹腔注射MPTP(30mg/kg),連續(xù)5d,制備帕金森病模型。同時(shí),采用LiCl(1mEq/kg)預(yù)處理7d后再給予MPTP組,及空白對(duì)照組。Westernblot檢測(cè)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路蛋白p-Ser9-GSK-3β、GSK-3β、β-catenin在腹側(cè)中腦不同時(shí)間點(diǎn)的變化情況。
　　結(jié)果:在MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型腹側(cè)中腦區(qū)域,檢測(cè)到經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的失活,表現(xiàn)為p-Ser9-GSK-3β和β-cateni

6、n表達(dá)的降低,且具有一定的時(shí)間依賴性,在第7d左右降至最低,隨后緩慢恢復(fù)。在紋狀體和大腦皮質(zhì)中,經(jīng)典Wnt信號(hào)通路蛋白沒有明顯變化。MPTP引起的p-Ser9-GSK-3β和β-catenin表達(dá)水平的降低均可被LiCl顯著升高。
　　結(jié)論:在MPTP誘導(dǎo)的帕金森病小鼠腹側(cè)中腦區(qū)域,存在經(jīng)典Wnt信號(hào)通路失活。
　　第三部分,Dickkopf-1在MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型中作用研究
　　目的:本實(shí)驗(yàn)旨在觀察經(jīng)典W

7、nt信號(hào)通路負(fù)性調(diào)控因子Dickkopf-1(DKK1)在MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型中的作用。
　　方法:C57/BL6小鼠腹腔注射MPTP(30mg/kg),連續(xù)5d,制備帕金森病模型。另有LiCl(1mEq/kg)預(yù)處理7d后再給予MPTP組,及空白對(duì)照組。分別于造模后0d(6h)、1d、2d、4d、7d、14d和21d取小鼠腹側(cè)中腦,Westernblot檢測(cè)DKK1在不同時(shí)間點(diǎn)的變化。免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)不同組DKK1與

8、TH陽性神經(jīng)元的共定位表達(dá)變化。
　　結(jié)果:①DKK1在MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森病模型腹側(cè)中腦表達(dá)顯著增多,在第7d達(dá)到最大值,隨后出現(xiàn)一定程度的恢復(fù),但始終顯著高于空白對(duì)照組。LiCl預(yù)處理對(duì)MPTP誘導(dǎo)的DKK1表達(dá)增多具有一定抑制作用。②免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示:MPTP損傷后第7d小鼠黑質(zhì)致密部DKK1表達(dá)明顯增多,而TH陽性神經(jīng)元數(shù)目顯著減少。LiCl預(yù)處理能夠改善TH陽性神經(jīng)元數(shù)目,抑制DKK1表達(dá)。
　　結(jié)論:DK