MPTP誘導小鼠帕金森病模型中,CLK1參與神經(jīng)膠質細胞激活及神經(jīng)毒性的研究.pdf

1、目的：研究clk1對MPTP誘導的小鼠帕金森病模型中神經(jīng)元損傷以及膠質細胞激活的影響及其機制。
　　方法：野生型和clk1缺失型C57BL小鼠（Mclk1+/-)采用亞急性帕金森病模型（MPTP，30mg/kg，5天)，利用行為學檢測，免疫組化和Western blotting方法分別檢測 MPTP模型后小鼠的行為學改變、腦內多巴胺能神經(jīng)元損傷及多黑質部位膠質細胞激活情況；體外原代培養(yǎng)星型膠質細胞 LPS/IFN-γ刺激，運用 R

2、eal-time PCR，ELISA，NO assay方法檢測星形膠質細胞激活情況，同時采用熒光探針DCFH-DA和JC-1分別檢測原代星型膠質細胞內ROS的產(chǎn)生和線粒體膜電位的變化；利用LPS/IFN-γ刺激后的原代星型膠質細胞上清與神經(jīng)元共培養(yǎng)，觀察原代星型膠質細胞對神經(jīng)元的神經(jīng)毒性作用；最后利用Western blotting檢測腦組織和體外培養(yǎng)星形膠質細胞內HIF-1α蛋白水平表達的變化。
　　結果：基礎條件下，與野生型比

3、較，Mclk1+/-小鼠在行為學表現(xiàn)，多巴胺能神經(jīng)元損傷，膠質細胞激活狀態(tài)及膠質細胞線粒體功能方面無明顯差異，但是在MPTP模型后，與野生型相比，Mclk1+/-小鼠爬桿時間顯著延長，轉棒運動時間顯著縮短；免疫組織熒光化學檢測發(fā)現(xiàn)中腦黑質部位TH陽性細胞數(shù)量顯著減少以及鄰近的GFAP和Iba1陽性細胞激活水平顯著升高；體外原代培養(yǎng)的Mclk1+/-小鼠星型膠質細胞在LPS/IFN-γ刺激后，TNF-α，NO的釋放和ROS生成顯著增加；線

4、粒體膜電位檢測發(fā)現(xiàn)，LPS/IFN-γ刺激后，星型膠質細胞線粒體膜電位顯著降低；膠質細胞條件培養(yǎng)基與神經(jīng)元共培養(yǎng)實驗發(fā)現(xiàn)，Mclk1+/-小鼠星型膠質細胞對神經(jīng)元的損傷作用加劇；在炎癥環(huán)境中，與野生型相比，clk1缺失可明顯升高腦內和星形膠質細胞內HIF-1α的表達。
　　結論：1.clk1缺失小鼠對MPTP誘導中腦多巴胺能神經(jīng)損傷更敏感。2.星型膠質細胞過度激活參與clk1缺失小鼠對MPTP誘導神經(jīng)元損傷的敏感性。3.clk1缺