2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞(BV2)建立小膠質(zhì)細(xì)胞炎性激活模型,應(yīng)用大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)來(lái)模擬多巴胺能(DA)神經(jīng)元。觀察在PI3K/AKt信號(hào)通路抑制劑LY294002抑制該信號(hào)通路的情況下,Sonic hedgehog(SHH)信號(hào)通路激活劑2,6,9-三取代嘌呤化合物(Purmorphamine,PM)激活該通路后對(duì)LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞促炎因子、抗炎因子、

2、帕金森相關(guān)基因Nurr1的表達(dá)以及其培養(yǎng)液對(duì)PC12細(xì)胞存活率的影響。進(jìn)一步應(yīng)用1-甲基-4-苯基-1、2、3、6-四氫吡啶(1-methy1-4-phenvl-1、2、3、6-tetrahvdropvridine,MPTP)來(lái)誘導(dǎo)小鼠帕金森病模型,LY294002鼻腔給藥抑制PI3K/AKt信號(hào)通路后,觀察PM腹腔注射激活SHH信號(hào)通路對(duì)小鼠行為學(xué)、小膠質(zhì)細(xì)胞、炎癥因子以及多巴胺能神經(jīng)元的影響。為帕金森病的臨床治療和用藥提供新的策略和

3、理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)分為體內(nèi)和體外兩部分實(shí)驗(yàn)。
  第一部分 Sonic hedgehog/PI3K/AKt信號(hào)通路對(duì)帕金森病炎癥細(xì)胞模型的影響
  目的:
  應(yīng)用LPS刺激BV2細(xì)胞建立小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥激活模型,探討SHH信號(hào)通路的激活對(duì)LPS誘導(dǎo)BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的抑炎作用是否與PI3K/AKt信號(hào)通路有關(guān)。
  方法:
  應(yīng)用LPS刺激BV2細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),通過(guò)Western Bloting實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)炎

4、癥反應(yīng)中PI3K/AKt信號(hào)通路的標(biāo)志物P-AKt蛋白的表達(dá)情況以及SHH信號(hào)通路與PI3K/AKt信號(hào)通路的關(guān)系;應(yīng)用LY294002處理BV2細(xì)胞來(lái)抑制PI3K/AKt信號(hào)通路后,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time quantitative PCR,Q-PCR)來(lái)檢測(cè)PM激活SHH信號(hào)通路對(duì)LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞的促炎因子IL-1β、TNF-a和抗炎因子TGF-β以及帕金森病相關(guān)基因Nurr1 mRNA的表達(dá)情況;通過(guò)CCK

5、-8檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)PC12細(xì)胞存活率的影響。
  結(jié)果:
  1)Western Bloting實(shí)驗(yàn)顯示:
 ?、倥c對(duì)照組相比,LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中有PI3K/AKt信號(hào)通路的抑制(P<0.01);
 ?、谂cLPS組相比,SHH信號(hào)通路的激活對(duì)LPS刺激下的P-AKt蛋白有上調(diào)作用(P<0.01;
  ③與PM+LPS組相比,Cyclopamine抑制SHH信號(hào)通路后明顯抑制SHH信號(hào)通路的上調(diào)P-

6、AKt蛋白作用(P<0.01);
  2)Q-PCR結(jié)果顯示:
 ?、倥cLPS組相比,PM激活SHH信號(hào)通路可以明顯抑制炎癥因子IL-1β、TNF-a和帕金森病相關(guān)基因Nurr1 mRNA的表達(dá)(均P<0.01),上調(diào)抗炎因子TGF-βmRNA的表達(dá)(P<0.01);
  ②與PM+LPS組相比,LY294002預(yù)處理抑制PI3K/AKt信號(hào)通路后明顯上調(diào)IL-1β、TNF-a mRNA的表達(dá)(均P<0.01),下調(diào)N

7、urr1、TGF-βmRNA的表達(dá)(均P<0.01);
  ③與LPS組相比,LY+LPS組明顯上調(diào)IL-1β、TNF-a以及TGF-βmRNA的表達(dá)(均P<0.01),明顯抑制Nurr1 mRNA的表達(dá)(P<0.01);
  3)CCK-8結(jié)果顯示:
 ?、倥c對(duì)照組相比,LPS組的上清培養(yǎng)液誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞存活率顯著下降(P<0.01);
  ②與LPS組相比,PM+LPS組的培養(yǎng)液可以促進(jìn)PC12細(xì)胞的存活

8、率(P<0.01);
  ③與PM+LPS組相比,LY294002+PM+LPS組培養(yǎng)液對(duì)PC12細(xì)胞的存活率有一定的抑制作用(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.炎癥反應(yīng)中有PI3K/AKt信號(hào)通路的抑制;
  2.SHH信號(hào)通路對(duì)PI3K/AKt信號(hào)通路有一定的調(diào)控作用;
  3.SHH信號(hào)通路的激活能降低 LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),促進(jìn)抗炎因子TGF-β的表達(dá)、抑制帕金森病相關(guān)基因Nurr1表達(dá);

9、>  4.SHH信號(hào)通路發(fā)揮的抑制炎癥作用以及PC12細(xì)胞的保護(hù)作用與PI3K/AKt信號(hào)通路有關(guān)。
  第二部分 Sonic hedgehog/PI3K/AKt信號(hào)通路對(duì)帕金森病模型中神經(jīng)炎癥、多巴胺能神經(jīng)元以及行為學(xué)的影響
  目的:
  應(yīng)用MPTP制作急性帕金森病模型,觀察SHH信號(hào)通路的激活在帕金森病模型的神經(jīng)炎癥中發(fā)揮多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用是否與PI3K/AKt信號(hào)通路有關(guān)。
  方法:
  

10、MPTP造就急性PD模型,通過(guò)Western Bloting實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè) PD模型中PI3K/AKt信號(hào)通路的表達(dá)情況以及體內(nèi)SHH信號(hào)通路激活對(duì)PI3K/AKt信號(hào)通路的影響,LY294002(LY)鼻腔給藥抑制PI3K/AKt信號(hào)通路后,PM腹腔注射激活體內(nèi)SHH信號(hào)通路,通過(guò)懸掛實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠行為學(xué)情況,免疫組織化學(xué)染色和 Western Bloting實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞和DA能神經(jīng)元的表達(dá)情況以及Q-PCR檢測(cè)相關(guān)炎癥因子的表達(dá)情

11、況。
  結(jié)果:
  1)Western Bloting(WB)結(jié)果顯示:
 ?、倥c對(duì)照組相比,PD模型中有PI3K/AKt信號(hào)通路的抑制(P<0.01);
  ②與MPTP組相比,SHH信號(hào)通路的激活對(duì)P-AKt蛋白有上調(diào)作用(P<0.01);
 ?、叟cPM+MPTP組相比,LY294002預(yù)處理后,能夠明顯抑制PI3K/AKt信號(hào)通路;
  2)Iba1免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:
 ?、倥c對(duì)

12、照組相比,PD模型黑質(zhì)中小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多,胞體變大、染色深、突起變短增粗;
  ②與MPTP組相比,PM+MPTP組的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少,胞體小、突起細(xì)長(zhǎng);
 ?、跮Y+PM+MPTP組中的小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量、大小、狀態(tài)與MPTP組以及LY+MPTP組中的小膠質(zhì)細(xì)胞類似;
  3)Iba1 WB結(jié)果顯示:
 ?、倥c對(duì)照組相比,MPTP組Iba1蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01);
  ②與MPTP組相比,SH

13、H信號(hào)通路的激活后明顯下調(diào)Iba1蛋白表達(dá),LY+MPTP組中的Iba1蛋白上調(diào)更顯著(均P<0.01);
 ?、叟cPM+MPTP組相比,LY294002預(yù)處理可以改善SHH信號(hào)對(duì)Ibal蛋白的抑制作用(P<0.01);
  4)TH免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:
 ?、倥c對(duì)照組相比,PD模型黑質(zhì)中THDA能神經(jīng)元數(shù)量顯著減少,胞體形態(tài)不完整,胞漿染色淺;
 ?、谂cMPTP組相比,PM+MPTP組的THDA能神經(jīng)元數(shù)

14、量增多,胞體形態(tài)比較完整,輪廓清晰,胞漿染色深;LY+MPTP組中的TH DA能神經(jīng)元數(shù)量稍減少,形態(tài)、著色相差不大;
  ③與PM+MPTP組相比,LY+PM+MPTP組中的TH DA能神經(jīng)元數(shù)量減少,形態(tài)不完整,著色淺;
  5)THWB結(jié)果顯示:
 ?、倥c對(duì)照組相比,MPTP組TH蛋白表達(dá)明顯下降;
 ?、谂cMPTP組相比,PM+MPTP組的TH蛋白表達(dá)上調(diào),LY+MPTP組中的TH蛋白下調(diào);
 ?、?/p>

15、與PM+MPTP組相比,LY294002明顯抑制SHH信號(hào)的誘導(dǎo)的TH上調(diào)作用;
  6)Q-PCR結(jié)果顯示:
 ?、倥c對(duì)照組相比,MPTP組的炎癥因子IL-1β、TNF-a表達(dá)上調(diào);
 ?、谂cMPTP組相比,PM+MPTP組的IL-1β、TNF-a表達(dá)下調(diào),LY+MPTP組中的IL-1β、TNF-a表達(dá)上調(diào);
 ?、叟cPM+MPTP組相比,LY294002明顯抑制SHH信號(hào)的誘導(dǎo)的IL-1β、TNF-a的下調(diào)作

16、用;
  7)懸掛實(shí)驗(yàn)顯示:
  ①與對(duì)照組相比,PD模型鼠懸掛時(shí)間得分明顯降低(P<0.01);
 ?、谂cMPTP組相比,PM+MPTP組的小鼠懸掛時(shí)間得分明顯升高(P<0.01);
  ③與PM+MPTP組相比,LY294002抑制PI3K/AKt信號(hào)通路后能夠明顯抑制SHH信號(hào)的促懸掛時(shí)間得分(P<0.01)。
  結(jié)論:
  1.PD模型中有PI3K/AKt信號(hào)通路的抑制;
  2.體內(nèi)

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