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文檔簡介
1、目的:
川崎病(Kawasaki disease,KD)導致的冠狀動脈損傷與內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能障礙其密切相關。我們的前期研究發(fā)現(xiàn):KD急性期,血清中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平顯著升高并損傷內(nèi)皮祖細胞功能;小檗堿可以動員EPCs并改善其功能。然而,上述研究的機理尚未闡明。本研究擬探討:小檗堿(berberin
2、e,BBR)能否通過激活磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidyl inositol3-kinase,PI3K)/絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B(serine/threonine protein kinase B,Akt)/內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)信號通路保護TNF-α誘導的EPCs損傷。為利用小檗堿防治KD誘發(fā)的冠狀動脈病變提供實驗基礎。
方法:
3、 收集健康志愿者外周靜脈血,采用密度梯度離心法得到外周靜脈血單核細胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMNCs),將PBMNCs誘導分化為EPCs。EPCs分為六組:空白對照組、BBR組、TNF-α組、BBR+TNF-α組、BBR+TNF-α+PI3K抑制劑(LY294002)組、BBR+TNF-α+eNOS抑制劑(L-NAME)組。MTT實驗法檢測各組EPCs的增殖能力。Greiss試劑顯色法
4、檢測各組EPCs培養(yǎng)基中的一氧化氮(nitric oxide,NO)濃度。RT-PCR檢測eNOS,PI3K和AKT的mRNA表達水平。Western-blot檢測eNOS,磷酸化eNOS(phospho-eNOS,p-eNOS),Akt,磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)和PI3K的蛋白表達水平。統(tǒng)計學分析采用成組t檢驗和方差分析。
結果:
1.TNF-α抑制 EPCs增殖能力,BBR明顯改善受到
5、TNF-α抑制的 EPCs增殖能力(P<0.05),BBR的這種效用可以被PI3K抑制物(LY294002)和eNOS抑制物(L-NAME)阻斷。
2.TNF-α抑制EPCs培養(yǎng)基中NO釋放水平,而BBR組明顯提高NO釋放水平。BBR可增加TNF-α組NO的分泌水平,而BRR的作用可被LY294002和L-NAME阻斷(P<0.05)。
3.小檗堿提高PI3K/Akt/eNOS mRNA的表達水平,而LY294002
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