轉(zhuǎn)染EGFP的人羊膜上皮細(xì)胞側(cè)腦室移植治療阿爾茨海默病模型鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.繁殖和鑒定阿爾茨海默病APPSWE/PS1DE9轉(zhuǎn)基因模型鼠,為進(jìn)一步的研究提供理想的動(dòng)物模型。
　　 2.觀察人羊膜上皮細(xì)胞在阿爾茨海默病模型鼠側(cè)腦室移植后的存活、遷移及分化情況。
　　 3.觀察人羊膜上皮細(xì)胞對(duì)阿爾茨海默病模型鼠的行為學(xué)、海馬區(qū)乙酰膽堿神經(jīng)遞質(zhì)及膽堿能神經(jīng)元和膽堿能纖維的影響。
　　 方法：
　　 1.8月齡母代及子代小鼠均用PCR檢測(cè)鑒定APPSWE基因。水迷宮和明暗箱觀察

2、行為學(xué),剛果紅及六氨銀染色觀察病理變化。
　　 2.轉(zhuǎn)染EGFP的人羊膜上皮細(xì)胞,側(cè)腦室移植,熒光鏡下觀察人羊膜細(xì)胞的存活及遷移情況,免疫組化檢測(cè)Oct-4 and Nanog在hAECs中的表達(dá)。
　　 3.將基因鑒定后的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性模型和陰性模型隨機(jī)分為四組:模型假手術(shù)組,模型治療組,野生型假手術(shù)組,野生型治療組。治療組側(cè)腦室注射人羊膜上皮細(xì)胞,假手術(shù)組側(cè)腦室注射等量的PBS。移植后5周,水迷宮和明暗箱觀察行為學(xué)變化；

3、高效液相電化學(xué)儀觀察海馬區(qū)乙酰膽堿的含量；乙酰膽堿酯酶染色觀察膽堿能神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)纖維的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.雄性和雌性APPswe/PS1小鼠互交,32d內(nèi)產(chǎn)8窩60只,全部存活。PCR鑒定母代16只小鼠APPswe基因表達(dá)全部陽(yáng)性；子代60只小鼠的43只APPswe基因表達(dá)為陽(yáng)性,17只基因表達(dá)為陰性,陽(yáng)性率為70.2％,存活率為100％。APP基因片段大小為300bp,轉(zhuǎn)基因鼠與野生型比較行為學(xué)有統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)差異(p<0.05)。轉(zhuǎn)基因模型鼠8月時(shí)在海馬和皮層出現(xiàn)淀粉樣蛋白沉積,被染成橘紅色,野生型小鼠沒(méi)有發(fā)現(xiàn)淀粉樣蛋白的沉積。兩組都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元纖維纏結(jié)。
　　 2.人羊膜上皮細(xì)胞在阿爾茨海默病模型鼠側(cè)腦室內(nèi)移植后5周可以存活并遷移至第三腦室,可表達(dá)干細(xì)胞的特異性標(biāo)記物Oct-4和Nanog。
　　 3.移植后5周,行為學(xué)觀察轉(zhuǎn)基因模型治療組和假手術(shù)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01),正常野生型老年鼠假手術(shù)組和治療組比較

5、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05),轉(zhuǎn)基因模型治療組和正常野生型老年鼠比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；轉(zhuǎn)基因模型治療組和假手術(shù)組乙酰膽堿含量相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05),轉(zhuǎn)基因模型治療組和野生型小鼠乙酰膽堿含量比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05),野生型小鼠治療組和假手術(shù)組乙酰膽堿含量比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。轉(zhuǎn)基因模型組神經(jīng)元纖維數(shù)量明顯少于野生型鼠,轉(zhuǎn)基因模型組治療組比假手術(shù)組神經(jīng)元纖維數(shù)量增加。
　　 結(jié)論：
　

6、　 1.阿爾茨海默病APPSWE/PS1DE9轉(zhuǎn)基因模型鼠通過(guò)雌雄交配能穩(wěn)定遺傳下去,在行為及病理上都與野生型鼠表現(xiàn)出顯著的差異。
　　 2.人羊膜上皮細(xì)胞具有干細(xì)胞的性質(zhì),移植后5周能在腦室中存活。
　　 3.人羊膜細(xì)胞側(cè)腦室移植對(duì)阿爾茨海默病APPSWE/PS1DE9轉(zhuǎn)雙基因模型鼠有治療作用。改善AD鼠的癥狀,其機(jī)制可能與人羊膜上皮細(xì)胞釋放的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用,存活了更多的膽堿能神經(jīng)元,增多的膽堿能神經(jīng)