脂肪干細胞側(cè)腦室定向移植治療大鼠腦出血.pdf

1、第一部分
　　 目的：建立大鼠尾狀核ICH模型，并觀察大鼠ICH后不同時間點神經(jīng)行為學和血腫周圍腦組織病理學的特點。
　　 方法：將成年SD大鼠40只，隨機分為假手術組和ICH組。ICH組大鼠通過立體定向術向尾狀核注入VII型膠原酶制成尾狀核ICH模型，并分為ICH后1d、3d、7d、14d及28d共5個亞組。假手術組以生理鹽水代替膠原酶。采用神經(jīng)行為學功能評分和HE染色分別觀察ICH大鼠神經(jīng)行為學和腦組織形態(tài)學的變化。

2、
　　 結(jié)果：成功建立了大鼠尾狀核ICH模型。假手術組在手術前及之后神經(jīng)行為學評分無明顯變化，ICH組后1d亞組大鼠神經(jīng)行為學評分出現(xiàn)升高，3 d亞組評分升高最明顯，以后逐漸恢復，其中3 d亞組與1 d和7 d亞組神經(jīng)行為學評分差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），3 d亞組與14 d、28 d亞組神經(jīng)行為學評分差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)；7 d亞組與14 d及28 d亞組間神經(jīng)行為學評分差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。1

3、d亞組大鼠的尾狀核區(qū)域可見不規(guī)則血腫形成；3d亞組腦水腫明顯，細胞間隙增寬；7d亞組血腫周圍腦組織有膠質(zhì)細胞增生；14d亞組血腫區(qū)逐漸形成不規(guī)則囊腔；28d亞組時囊腔仍然存在，血腫周邊區(qū)見膠質(zhì)細胞進一步增多。
　　 結(jié)論：大鼠VII型膠原酶誘導ICH模型死亡率低，成功率高，血腫穩(wěn)定,適合臨床實驗研究，是比較理想的實驗性ICH模型。ICH后大鼠神經(jīng)行為學的改變、血腫及囊腔的形成與出血時間有關，有助于選擇ICH的治療時間窗。

4、　　
　　 第二部分
　　 目的：ADSCs定向移植入ICH大鼠側(cè)腦室內(nèi)，觀察ADSCs的遷徙、分化情況及移植ADSCs后大鼠神經(jīng)行為學改變。
　　 方法：體外培養(yǎng)大鼠ADSCs，于移植前48 h用BRDU抗原標記ADSCs。另取SD大鼠50只制作大鼠尾狀核ICH模型，隨機分為ADSCs組及對照組，各25只。于造模后48h時進行移植，ADSCs組右側(cè)腦室定向移植體外BRDU標記的ADSCs，對照組右側(cè)腦室定向

5、注射等量生理鹽水，分別于移植后1、3、7、14及28d（每時間點5只大鼠）對大鼠進行Zea Longa神經(jīng)行為學評分，評分后處死大鼠制作腦組織冰凍切片，行免疫熒光雙標染色檢測BRDU陽性細胞及神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞的變化，采用TUNEL染色檢測凋亡細胞，通過免疫組化觀察VEGF的表達。
　　 結(jié)果：體外培養(yǎng)的ADSCs表現(xiàn)出成脂成骨分化的能力，在移植后3、7、14 d，ADSCs組大鼠神經(jīng)行為學評分明顯優(yōu)于對照組 （P<0.05）

6、。免疫雙熒光檢測顯示，BRDU標記的ADSCs在大鼠腦組織內(nèi)存活并且向病灶部位遷移，部分分化為神經(jīng)膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元細胞。TUNEL檢測顯示，移植后3d時ADSCs組凋亡細胞數(shù)目明顯少于對照組（P<0.05）。移植3d后，ADSCs組VEGF的表達均明顯高于對照組（P<0.05）。
　　 結(jié)論：經(jīng)側(cè)腦室定向移植的ADSCs在腦損傷病灶周圍可以存活，并可分化為神經(jīng)樣細胞；移植ADSCs后可抑制細胞凋亡，分泌VEGF促進新生血管的生成