中國人面肩肱型肌營養(yǎng)不良癥4q亞端粒區(qū)等位基因4qA-4qB結(jié)構(gòu)特征的研究.pdf

1、一、研究目的： 1、研究中國人群面肩肱型肌營養(yǎng)不良癥(FSHD)連鎖位點，4q35亞端粒區(qū)等位基因4qA/4qB的的結(jié)構(gòu)特征，分析等位基因頻率和基因型頻率，探討其分布規(guī)律及易位與D4Z4重復(fù)單位缺失的關(guān)系。 2、研究FSHD患者等位基因4qA/4qB的結(jié)構(gòu)特征，探討其特異性分布規(guī)律與FSHD的關(guān)系。 3、研究4qA/4qB基因型與FSHD臨床表型的關(guān)系，初步探討等位基因4qA/4qB在FSHD分子發(fā)病機制中的作用

2、。 二、研究方法： 1、采用EcoRⅠ酶切、EcoRⅠ/BlnⅠ雙酶切基因組DNA，脈沖電場電泳分離(PFGE)，P13E-11探針Southern雜交，檢測正常人群及FSHD患者4q35區(qū)EcoRⅠ片段，曲線擬合計算片段大小，并判斷片段的4q和10q來源。 2、同時采用HindⅢ酶切基因組DNA，PFGE電泳分離，4qA探針、4qB探針Southern雜交，判斷正常人群及FSHD患者4q35區(qū)EcoRⅠ片段為4

3、qA型或4qB型，曲線擬合計算各型EcoRⅠ片段的大小。采用χ2檢驗比較正常人和FSHD患者的4qA/4qB基因頻率和基因型頻率差異；t檢驗比較各型EcoRⅠ片段長度的差異。 3、判斷4qA型、4qB型雜交片段的4q和10q來源，分析4qA/4qB與10q26間的相互易位形式和易位頻率。采用χ2檢驗比較正常人、散發(fā)型FSHD和家族型FSHD患者的易位頻率差異。 4、采用t檢驗比較4qA/4qB不同基因型患者發(fā)病年齡的差異

4、；采用線性回歸法分析患者致病片段大小與不同基因型的關(guān)系，以及發(fā)病年齡與致病型EcoRⅠ片段長度的關(guān)系。 三、研究結(jié)果： 1、正常人群4qA/4qB基因頻率及基因型頻率分布：82名正常人中，4號染色體上4qA、4qB的基因頻率分別為47.6％和52.4％，兩者無顯著性差異(P=0.383＞0.05)，男性和女性4qA/4qB基因頻率無顯著性差異(P=0.995＞0.05)；4qA純合型占20％(15/75)，4qB純合型占

5、26.7％(20/75)，4qA/4qB雜合型占53.3％(40/75)，雜合型與純合型頻率分布有顯著性差異(P=0.001＜0.05)，4qA純合型與4qB純合型分布差異無顯著性(P=0.334＞0.05)。 2、正常人群4qA、4qB片段長度及易位分布：60名正常人中，4qA片段長度均值為(89.2±10.9)kb，中位數(shù)為81kb；4qB片段長度均值為(86.8±10.1)kb，中位數(shù)為74kb。等位基因4qA/4qB片段

6、長度的分布無顯著性差異(t=0.329，P＞0.05)。兩名個體發(fā)現(xiàn)小于35kb的4qA型EcoRⅠ片段，占3.3％；兩名個體出現(xiàn)小于35kb的4qB型EcoRⅠ片段，占3.3％。易位型占11.7％(7/60)，其中10q→4qA易位占8.3％(5/60)，10q→4qB易位占3.3％(2/60)，未發(fā)現(xiàn)4qB→10q易位和4qA→10q易位。 3、FSHD患者的4qA、4qB片段分布特點：26名FSHD患者中，均檢測到一條長度

7、小于35kb的4q35EcoRⅠ致病性片段，片段大小14～34.5kb，平均長度為21.2kb，均為4qA型；1名患者同時存在31.5kb的短4qB型EcoRⅠ片段。散發(fā)型患者易位頻率為29.4％(5/17)，明顯高于家族型易位頻率11.1％和正常人的易位頻率11.7％。4號染色體上4qA基因頻率為64.4％，4qB基因頻率為35.6％，與正常人群中4qA、4qB分布頻率有顯著性差異(P=0.026＜0.05)。 4、4qA/4

8、qB基因型與臨床表型關(guān)系分析：4qA純合型患者占35％(7/20)，該型患者中男性85.7％明顯多于女性14.3％(P=0.029＜0.05)；4qA/4qB雜合型患者占65％(13/20)；無4qB純合型。患者的發(fā)病年齡與4qA型EcoRⅠ片段大小成明顯正相關(guān)(r=0.476，P＜0.05)，4qA純合型患者發(fā)病年齡明顯早于4qA/4qB雜合型患者(t=8.243，P＜0.01)，4qA純合型和4qA/4qB雜合型患者致病片段長度無顯

9、著性差異(P=0.189＞0.05)。 四、研究結(jié)論： 1、中國人群4q35區(qū)等位基因4qA/4qB的基因頻率相近；不同種族間4qA/4qB基因頻率分布一致；4qA雜合基因型頻率明顯高于純合基因型頻率，4qA和4qB純合基因型頻率無顯著差異；4qA/4qB的片段長度存在多態(tài)性；。 2、FSHD患者中4qEcoRⅠ致病片段均為4qA型，短的4qB型EcoRⅠ片段不致病，提示4qA與FSHD發(fā)病相關(guān)。 3、患