酮洛芬前體藥物經皮吸收的選擇性及代謝機理研究.pdf

1、該課題以臨床常用的非甾體解熱鎮(zhèn)痛藥酮洛芬為模型藥物，合成一系列酯類前體藥物，從離體活性皮膚、皮膚細胞及在體皮膚三方面進行經皮吸收過程中皮膚生物轉化的深入研究，并從mRNA水平揭示皮膚羧酸酯酶代謝的分子機理.通過該課題的研究，可為手性藥物開發(fā)和前體藥物透皮吸收制劑的研制提供理論指導和技術借鑒.該文建立酮洛芬、酮洛芬甲酯、酮洛芬乙酯、酮洛芬異丙酯的反相高效液相色譜測定方法，具有前體藥物和代謝物不經分離直接測定、標準曲線線性良好、方法回收率和

2、精密度都符合體內外經皮滲透和代謝實驗測定需要等特點.采用AGP手性柱建立酮洛芬對映體的反相高效液相色譜拆分、測定方法，標準曲線線性良好，皮膚蛋白等雜質不干擾測定，方法回收率和精密度達到體外經皮滲透和代謝實驗的分析要求.采用離體活性皮膚的表皮勻漿進行水浴溫孵實驗，考察酮洛芬前體藥物的皮膚代謝特征.人體表皮與不同種類動物表皮的酯酶代謝能力相差顯著（P＜0.05），按蛋白含量校正它們的代謝能力依次為SD大鼠表皮＞長大二元雜交幼豬表皮＞成人包皮

3、的表皮＞新西蘭家兔表皮＞嬰兒表皮.人體表皮代謝產物中以R-酮洛芬為主，幼豬和家兔表皮代謝產物中也以R-酮洛芬占優(yōu)勢，但SD大鼠表皮勻漿代謝產物中酮洛芬對映體的濃度未見差異（P＞0.05），說明不同種類動物表皮與人體表皮酯酶代謝的能力及選擇性不同.采用外科手術和酶消化等方法體外分離皮膚，以水平式（兩室）擴散池進行酮洛芬和前體藥物透過全皮、除角質層皮膚和真皮的離體滲透代謝實驗.在經離體裸小鼠全皮和真皮的滲透代謝實驗中，酮洛芬前體藥物經全皮滲

4、透代謝的穩(wěn)態(tài)速率顯著大于經真皮滲透代謝的穩(wěn)態(tài)速率（P＜0.05），酮洛芬前體藥物經皮滲透代謝實驗結束后皮膚中的殘留總量顯著大于酮洛芬經皮滲透實驗結束后皮膚中的殘留量（P＜0.05），說明裸小鼠的表皮是酯酶代謝的主要部位，而酮洛芬前體藥物有助于增加皮膚局部的藥物積累.在經離體猴全皮、除角質層皮膚及真皮的滲透代謝實驗中，酮洛芬前體藥物經全皮滲透代謝的穩(wěn)態(tài)速率小于除角質層皮膚（P＜0.05），而實驗結束后皮膚中殘留藥物的總量大于除角質層皮膚（

5、P＜0.05），說明角質層是經皮吸收的屏障而不是皮膚代謝的部位，且能夠貯存很多藥物;酮洛芬前體藥物經真皮滲透代謝的穩(wěn)態(tài)速率小于全皮和除角質層皮膚（P＜0.05），但相對較厚的猴真皮也具有相當大的酯酶代謝能力.采用RT-PCR方法，以人肝L02細胞株為陽性對照，首次研究皮膚羧酸酯酶的表達特征.PCR產物包括全部的表達羧酸酯酶活性位點的序列，說明該實驗設計引物正確、RT-PCR方法可靠，這為進一步研究人體其它器官或組織中羧酸酯酶的表達提供了

6、良好借鑒.皮膚組織、表皮角質形成細胞、真皮成纖維細胞和HaCaT細胞系中都有人肝羧酸酯酶-2的強表達，而人肝羧酸酯酶-1在它們中的表達未被檢測到，說明人肝羧酸酯酶-2對酮洛芬前體藥物的水解有選擇性，這為廣大經皮吸收研究人員合成和篩選前體藥物以改善藥物經皮吸收特性的研究提供了理論依據.在以后的實驗中我們將進一步利用分子生物學的有關技術識別皮膚組織中的藥物代謝酶，并在體外表達重組蛋白質后鑒定其藥理作用，這種方法為深入研究各種皮膚代謝酶的結構