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文檔簡介
1、目的:觀察潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌變(ulcerativecolitisassociatedcarcinogenesis,UCAC或簡稱潰結(jié)相關(guān)癌變)小鼠組織形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)以及結(jié)腸黏膜β連環(huán)蛋白(β-catenin)、T細胞因子4(Tcellfactor4,Tcf-4)、C-myc、細胞周期素1(CyclinD1)表達變化,探討健脾清熱活血方藥防治潰結(jié)相關(guān)癌變的可能機制。
方法:120只清潔級Balb/c小鼠隨機分6組,每組20
2、只,分設(shè)正常組、模型組、對照組(0.4g/kg)、治療組(4.29g/kg,8.58g/kg,17.16g/kg);除外正常組,其余各組采用DMH/DSS復合法制備潰結(jié)相關(guān)癌變模型,模型制備結(jié)束后,對照組給予美沙拉嗪配制液,治療組分別給予不同劑量健脾清熱活血方藥水提液,模型組和正常組予等劑量生理鹽水灌胃處理,連續(xù)干預16周。應(yīng)用光鏡、透射電鏡觀察潰結(jié)相關(guān)癌變小鼠結(jié)腸組織形態(tài)學及超微結(jié)構(gòu)變化,應(yīng)用免疫組化(Immunohistochemi
3、stry)、Western-blot技術(shù)、實時熒光定量(Real-time)PCR技術(shù)檢測β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1等在潰結(jié)相關(guān)癌變中的表達以及不同劑量健脾清熱活血方藥干預上述指標的變化。
結(jié)果:(1)正常組小鼠結(jié)腸肉眼未見明顯異常,光鏡下可見部分結(jié)腸黏膜有少許炎性細胞浸潤,電鏡下上皮細胞大小一致、排列整齊、結(jié)構(gòu)完整,細胞器均未見明顯異常;模型組結(jié)腸肉眼可見漿膜層散在、多處息肉狀隆起變化,
4、光鏡下可見黏膜上皮脫落,腺體萎縮、高級別上皮內(nèi)瘤變,部分癌變,電鏡下可見大量大小不等、排列紊亂的上皮細胞,胞核不規(guī)則、核仁增大并上移,線粒體大量增生、形態(tài)欠規(guī)則,局灶可見明顯擴張、腫脹;對照組和各治療組小鼠近盲腸處結(jié)腸黏膜肉眼可見充血、水腫,均較模型組有不同程度的減輕,漿膜層偶可見息肉狀隆起樣改變,光鏡下各組結(jié)腸黏膜均可見到充血腫脹,個別輕度不典型增生和大量淋巴濾泡出現(xiàn)、未見潰瘍及癌變,電鏡下各組亦均可見上皮細胞體積明顯變小,核染色質(zhì)邊
5、集、核固縮或碎裂,核膜斷裂,明顯調(diào)亡小體形成。(2)正常組β-catenin胞膜陽性表達,Tcf-4、C-myc、CyclinD1為陰性;模型組β-catenin、Tcf-4呈胞質(zhì)和/或胞核異位表達,C-myc、CyclinD1呈胞漿異位表達,與正常組有明顯差異(P<0.05);對照組和治療組β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1陽性表達減少,多以胞膜為主,均與模型組有明顯差異(P<0.05),對照組與各治療組之間
6、均有明顯差異(P<0.05),其中各治療組之間無明顯差異(P>0.05)。(3)與正常組比較,模型組結(jié)腸β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1蛋白及其mRNA呈高表達特點(P<0.05);對照組和治療組可明顯下調(diào)β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1蛋白及其mRNA,與模型組比較,有統(tǒng)計學意義(P<0.05),對照組與各治療組之間均有明顯差異(P<0.05),其中各治療組之間無明顯差異(P>0
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