HB-EGF-EGFR通路調控腹膜通透性的實驗研究.pdf

1、腹膜透析（腹透）是治療終末期腎衰竭的主要手段之一。長期腹透后腹膜發(fā)生血管新生和通透性增加，導致腹膜超濾減少，是患者退出腹透的主要原因之一。然而，腹膜血管新生和通透性增加的機制目前尚不清楚。血管周細胞是微血管的重要組成部分，通過與內皮細胞的密切聯(lián)系，共同調控血管的形成、穩(wěn)定、重塑及通透性。肝素結合表皮生長因子（Heparin-binding epidermal growth factor，HB-EGF）通過與其表達在周細胞上的表皮生長因子

2、受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)結合來募集周細胞，從而在血管新生中起重要作用。本研究通過構建尿毒癥腹膜透析大鼠模型，觀察HB-EGF/EGFR在腹膜的表達，及其與腹膜周細胞分布、血管新生和腹膜轉運功能之間的關系，旨在探討腹膜血管新生機制，為防治腹膜血管新生，長期保持腹膜功能尋找新的思路。
　　 本研究采用雄性Wistar大鼠32只，以5/6腎切除構建尿毒癥大鼠模型，成模后行腹透植

3、管術，植管1周后開始腹透。大鼠分為以下4組：對照組（n=8），行左右腎包膜剝除手術；尿毒癥非透析組（n=8），5/6腎切除尿毒癥大鼠；尿毒癥腹透組（n=8），給予4.25％葡萄糖腹透液3ml/100gBW進行腹透，每日2次；CRM197組（n=8），給予含10ug/kg CRM197的4.25％葡萄糖腹透液進行腹透，每日2次。4周后處死大鼠，各組大鼠處死前行腹膜平衡試驗，測定腹膜溶質轉運和超濾功能。采集腹膜標本進行形態(tài)學檢測包括血管周細

4、胞分布情況、血管數量、間皮細胞脫落程度和間皮細胞完整程度，并采用免疫組化方法檢測腹膜組織HB-EGF及其受體EGFR的表達。
　　 透析4周后，與對照組及尿毒癥非透析組大鼠相比，尿毒癥腹透組大鼠腹膜HB-EGF、EGFR蛋白的表達明顯下降（p=0.002，p=0.011）。形態(tài)學檢查顯示尿毒癥腹透組大鼠腹膜血管計數較對照組及尿毒癥非透析組明顯增加（22.8±3.3 vs 2.6±1.1個/HP，p<0.001；22.8±3.3

5、vs 6.9±2.8個/HP，p<0.001）；周細胞血管覆蓋率下降。采用CRM197阻斷HB-EGF后腹膜血管計數（36.5±3.7vs 22.8±3.3個/HP，p<0.001）進一步增加，血管周細胞減少更為明顯。平衡試驗結果顯示尿毒癥腹透組大鼠腹膜D/Pcr較對照組及尿毒癥非透析組明顯增加（0.88±0.06 vs 0.70±0.11，p<0.001；0.88±0.06 vs0.79±0.08，p=0.035）；葡萄糖D/D0較對

6、照組及尿毒癥非透析組明顯下降（0.54±0.16 vs 0.85±0.08，p<0.001；0.54±0.16 vs0.69±0.06，p=0.006）；腹膜超濾量明顯減少（0.48±0.64 vs 4.58±1.64ml，p<0.001；0.48±0.64 vs2.29±0.50ml，p=0.018）。采用CRM197阻斷HB-EGF后腹膜D/Pcr進一步增加（0.97±0.02vs 0.88±0.06，p=0.038）；葡萄糖D/D

7、0進一步下降（0.33±0.08vs 0.54±0.16，p=0.007）；超濾量更為減少（-1.05±1.82 vs 0.48±0.64 ml，p=0.041）。腹膜HB-EGF、EGFR表達量與腹膜血管數呈負相關（r=-0.828，p<0.001；r=-0.857，p<0.001）。
　　 綜上，我們成功建立了尿毒癥腹透大鼠模型。腹透引起尿毒癥大鼠腹膜周細胞分布減少，血管數量增加，超濾功能下降，同時下調尿毒癥大鼠腹膜HB-E