Toll樣受體4、血栓調(diào)節(jié)蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶-9在大鼠多器官功能障礙綜合征中的表達(dá)變化.pdf

1、目的：通過建立并改良多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)動物模型，檢測MODS大鼠模型中外周血白Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)、血清血栓調(diào)節(jié)蛋白(thrombomodulin,TM)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的濃度變化以及它們在肺、腎、肝組織中的表達(dá),研究TLR4的表達(dá)的

2、變化與內(nèi)皮細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)損傷的關(guān)系，初步探討TLR4在MODS中的作用，進(jìn)一步證實細(xì)胞外基質(zhì)的損傷在MODS中的作用。 方法：成年雄性SD大鼠40只，隨機分為對照組(生理鹽水組8只)、MODS模型組(32只)，模型組又分為造模后6h、12h、24h、48h不同時相，每組8只。MODS模型制備參照并改良陳德暉 “二次打擊模型”即“眼球失血加腹腔注射脂多糖（LPS）”：大鼠左眼球取血2ml/100g,在放血4小時后予無菌腹腔注射L

3、PS 5mg/kg，造模完成后在不同的時相處死大鼠搜集標(biāo)本。光鏡觀察肺、腎、肝標(biāo)本在MODS不同時相時的結(jié)構(gòu)變化;流式細(xì)胞技術(shù)（FCM）檢測各組外周血白細(xì)胞和各組織表面TLR4的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測MODS不同時相血清中TM和MMP-9的濃度變化；免疫組化法檢測TM和MMP-9在MODS不同時相的肺、腎、肝中的表達(dá)。 結(jié)果：（1）病理形態(tài)學(xué)檢查：正常對照組肺、肝、腎組織結(jié)構(gòu)無改變；MODS各組肺、肝、腎組織

4、損傷較重。（2）FCM檢測各組外周血白細(xì)胞和各組織表面TLR4蛋白表達(dá)：造模后6-48h，MODS大鼠模型外周血白細(xì)胞TLR4的表達(dá)即顯著高于正常對照組（P<0.01），其峰值見于造模后12h（P<0.01）,24-48h有所下降。與對照組比較，造模后6h肺、肝、腎組織TLR4的表達(dá)開始增高，12h達(dá)到高峰（P<0.01），24h-48h開始下降。（3）ELISA檢測血清中TM和MMP-9的蛋白表達(dá)：與對照組相比，血清TM的陽性表達(dá)6h

5、組有所增加（P<0.01），12h達(dá)到高峰（P<0.01），隨后24-48h下降，與正常對照組比較均有顯著性降低（P<0.01-0.05）。血清MMP-9的陽性表達(dá)6-48h組均比正常對照組有所增加。（4）免疫組化法測定TM和MMP-9肺、腎、肝組織中的蛋白表達(dá)：與對照組相比，肺、腎、肝組織TM的陽性表達(dá)6h組有所增加，12h達(dá)到高峰(P<0.01),隨后24h-48h下降。肺、腎、肝MMP-9的陽性表達(dá)6-48h組均比正常對照組有所增

6、加，12h達(dá)到高峰（P<0.01），24h-48h開始下降，但仍高于正常對照組（P<0.01-0.05）。 結(jié)論：(1)在MODS發(fā)病早期，細(xì)菌內(nèi)毒素可迅速侵入血液循環(huán)，上調(diào)白細(xì)胞及肺、腎、肝組織細(xì)胞的TLR4表達(dá)，其激活后通過促進(jìn)多種炎性因子的分泌損傷組織器官內(nèi)皮細(xì)胞和基質(zhì)，TLR4可能參與了MODS的病理生理過程。(2)在MODS早期即存在內(nèi)皮細(xì)胞及其基質(zhì)的損傷，TM和MMP－9可以作為內(nèi)皮和細(xì)胞外基質(zhì)損傷的血清學(xué)標(biāo)志物，可