芹菜素、針刺對(duì)LPS誘導(dǎo)的SD大鼠乳腺炎的抗炎效果及其機(jī)制研究.pdf

1、芹菜素是治療乳腺炎要藥的重要成分，屬實(shí)際無(wú)毒、無(wú)遺傳毒性的黃酮類化合物，且擁有較好的抗炎作用;針刺治療疾病安全方便，該法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于炎癥疾病的治療，但是芹菜素或/和針刺治療乳腺炎的效果還未見(jiàn)報(bào)道。本研究以SD大鼠為試驗(yàn)對(duì)象，在建立乳腺炎模型的基礎(chǔ)上，對(duì)芹菜素或/和針刺對(duì)乳腺炎的治療效果開(kāi)展體內(nèi)研究;并分離培養(yǎng)SD乳腺上皮細(xì)胞，進(jìn)一步研究芹菜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞炎性損傷的保護(hù)作用及機(jī)制，以期為臨床應(yīng)用芹菜素和針刺治療乳腺炎提供科

2、學(xué)的試驗(yàn)依據(jù)。
　　首先建立SD大鼠乳腺炎模型。30只SD雌鼠于產(chǎn)后72 h隨機(jī)分為對(duì)照組和5個(gè)試驗(yàn)組，每組5只，各試驗(yàn)組大鼠經(jīng)第四對(duì)乳頭灌注不同劑量LPS（10μg/側(cè)、20μg/側(cè)、30μg/側(cè)、40μg/側(cè)、50μg/側(cè)），對(duì)照組灌注等量PBS。灌注后24 h觀察各大鼠臨床癥狀、乳腺組織病理學(xué)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組大鼠第四對(duì)乳腺均可觀察到不同程度炎癥反應(yīng)，且與LPS劑量呈依賴關(guān)系。結(jié)果表明，成功建立LPS誘導(dǎo)哺乳期SD大鼠乳

3、腺炎模型。
　　然后，利用建立的SD大鼠乳腺炎模型，探討芹菜素、針刺對(duì)乳腺炎的治療效果。將乳腺炎SD大鼠隨機(jī)分為四組:LPS刺激組（LPS組）、芹菜素治療組（Api組）、針刺治療組(Acu組)、芹菜素聯(lián)合針刺治療組（Api+Acu組），正常SD大鼠為對(duì)照組（Con組），每組5只。在LPS灌注后的24 h開(kāi)始實(shí)施治療，每天一次，治療5天，最后一次治療后的24 h處死大鼠收集乳腺組織。觀察乳腺組織的病理學(xué)變化;qRT-PCR和ELIS

4、A方法檢測(cè)乳腺組織中TNF-α、IL-1β和IL-6的表達(dá)水平;western blot方法檢測(cè)MPO表達(dá)水平和TLR4/NF-κB信號(hào)通路情況。結(jié)果顯示，與LPS組相比，三個(gè)治療組的乳腺組織病變明顯減輕，MPO蛋白水平顯著降低，TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白水平均顯著降低，且TLR4/NF-κB信號(hào)通路的激活被顯著抑制。以上結(jié)果說(shuō)明芹菜素、針刺能通過(guò)抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路來(lái)治療LPS引起的SD大鼠乳腺炎。<

5、br>　　最后，分離培養(yǎng)SD大鼠乳腺上皮細(xì)胞，研究芹菜素對(duì)LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞炎性損傷的保護(hù)作用和機(jī)制。MTT法檢測(cè)芹菜素對(duì)大鼠乳腺上皮細(xì)胞的毒性作用，qRT-PCR和ELISA方法檢測(cè)芹菜素對(duì)大鼠乳腺上皮細(xì)胞中TNF-α、IL-1β和IL-6表達(dá)水平的影響。westernblot和IIF法檢芹菜素對(duì)SD大鼠乳腺上皮細(xì)胞中TLR4/NF-κB信號(hào)通路的影響。結(jié)果顯示，芹菜素在1～10μg/mL的濃度下無(wú)細(xì)胞毒性作用;和LPS組相比，

6、芹菜素預(yù)處理細(xì)胞能夠顯著降低TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白水平;western blot結(jié)果顯示芹菜素是通過(guò)抑制乳腺上皮細(xì)胞中TLR4/NF-κB信號(hào)通路的激活而發(fā)揮其抗炎作用的，IIF法檢測(cè)結(jié)果證明，芹菜素可抑制p65的磷酸化及轉(zhuǎn)移入核。
　　本試驗(yàn)對(duì)芹菜素、針刺治療乳腺炎的效果和作用機(jī)理進(jìn)行了初步探索性研究，發(fā)現(xiàn)芹菜素、針刺能使TLR4的表達(dá)下調(diào)并對(duì)下游NF-κB信號(hào)通路的激活起到抑制作用，最終使乳腺中TNF