丹參水提物對LPS誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜上皮細胞炎癥的抗炎機制研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜上皮細胞的炎性病變是奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病的根本所在，探究炎癥過程中上皮細胞結(jié)構(gòu)與功能的變化，將有助于闡明疾病發(fā)病機制和治療藥物的研發(fā)。丹參是廣泛用于治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的中藥之一，但從子宮內(nèi)膜上皮細胞研究丹參的作用機制的報道較少。為了探討丹參水提物對LPS誘導(dǎo)的炎癥模型的保護機制，開展了以下研究。
　　1.篩選LPS誘導(dǎo)炎癥模型的最佳劑量和作用時間。
　　設(shè)置5個不同濃度LPS分別作用于山羊EEC6h、12h、24h后，

2、MTT法檢測EEC的細胞活性。結(jié)果表明5μg/mL LPS作用12h時促進細胞增殖作用最為明顯，在此基礎(chǔ)上，建立EEC炎癥模型，ELISA檢測模型組中TNF-α和IL-1β含量顯著高于對照組(P＜0.01)，故確定LPS最佳致炎劑量為5μg/mL，最佳作用時間是12h。
　　2.篩選SME對EEC最佳作用劑量。
　　以6個不同濃度的SME作用EEC24h，結(jié)果表明SME對EEC未產(chǎn)生明顯毒性，且促進EEC增殖。由此確定SME

3、作用濃度分別為250μg/mL（高劑量組）、100μg/mL（中劑量組）、10μg/mL（低劑量組）。
　　3.SME對EEC炎癥模型中TNF-α、IL-1β、NO、PGE2、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9等蛋白表達的影響。
　　分別用高、中、低劑量的SME處理EEC細胞炎癥模型，觀察SME作用0h、4h、6h、12h、18h、24h、36h后各項指標(biāo)的變化。結(jié)果表明，模型組中TLR4、CD14、TNF-α、IL

4、-1β、NO、PGE2、MMP-2和MMP-9等蛋白在各自到達峰值時含量均明顯高于對照組(P＜0.01);不同濃度SME作用炎癥模型后，均能使這些指標(biāo)降低，且高劑量SME作用效果最為明顯(P＜0.01)。
　　4.SME對EEC炎癥模型中相關(guān)基因表達的影響。
　　實時熒光定量PCR檢測SME對EEC炎癥模型中相關(guān)基因表達，結(jié)果表明，模型組中TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9 mRNA基因表達水

5、平到達峰值時顯著高于對照組(P＜0.01)。用高、中、低劑量的SME處理后均能降低細胞炎性因子TNF-α、IL-1β、TLR4、CD14、MMP-2、MMP-9的表達，且高劑量SME作用最為明顯(P＜0.01)。另外，隨著作用時間的延長，MMP-2、MMP-9表達逐漸降低，24h后明顯低于對照，SME作用后又逐漸恢復(fù)到正常水平。
　　綜上所述，EEC炎癥反應(yīng)的發(fā)生可能與LPS誘導(dǎo)激活TLR信號通路(TLR4、CD14)，進而上調(diào)細

6、胞因子（TNF-α、IL-1β）、炎癥介導(dǎo)因子(NO、PGE2)和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的表達有關(guān)。而SME作用于炎癥細胞后，通過降低炎癥介導(dǎo)因子、TLR信號通路的表達，達到減緩炎性反應(yīng)的程度;在炎癥反應(yīng)初期，SME通過下調(diào)MMPs的表達，抑制了子宮內(nèi)膜細胞結(jié)構(gòu)被降解的炎性損傷，并在炎癥反應(yīng)后期通過上調(diào)MMP-2、MMP-9的表達，從而提高子宮自我修復(fù)重塑的能力。以上可能是LPS誘導(dǎo)炎性反應(yīng)的發(fā)生機制和丹參提取物的抗炎