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文檔簡介
1、目的:
以UU1感染和非感染的人正常子宮內(nèi)膜上皮細胞為研究對象,應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),分析比較在感染與非感染UU1的情況下,人子宮內(nèi)膜上皮細胞胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達變化,并對其進行生物信息學(xué)分析,期望找到與UU發(fā)病相關(guān)的蛋白質(zhì),為研究UU發(fā)病機制、篩選UU感染相關(guān)標志物提供新的研究方法和線索。
方法:
本課題采用體外實驗的方法,以人正常子宮內(nèi)膜上皮細胞作為模型進行研究,首先以不同濃度UU1感染人子宮內(nèi)膜上皮細胞,然
2、后通過MTT實驗,測定人子宮內(nèi)膜上皮細胞感染后的存活率,選用1×107copy/ml UU1感染人子宮內(nèi)膜上皮細胞,并設(shè)陰性對照組(不添加UU1僅加等量的新鮮UU培養(yǎng)液),于24小時后分別提取細胞內(nèi)的蛋白質(zhì),處理結(jié)束后,提取各組的胞內(nèi)蛋白質(zhì),經(jīng)2D Clean-up試劑盒純化,進行蛋白質(zhì)定量,并用熒光染料Cy2、Cy3及Cy5進行標記,然后將各組蛋白進行2D-DIGE電泳,得到Cy2、Cy3及Cy5標記的非感染和UU1感染的人子宮內(nèi)膜上
3、皮細胞凝膠圖譜,通過DeCyder6.5差異分析軟件進行分析比對后,再通過MALDI-TOF-MS質(zhì)譜對其進行鑒定,并利用生物信息學(xué)對質(zhì)譜鑒定出的差異蛋白質(zhì)進行分析。
結(jié)果:
建立了非感染和UU1感染的人子宮內(nèi)膜上皮細胞凝膠圖譜。通過DeCyder6.5軟件分析,UU1處理人子宮內(nèi)膜上皮細胞24小時后發(fā)現(xiàn)有41個蛋白點與對照組比較在量上顯著增加,而有19個蛋白點表達明顯降低。利用MALDI-TOF-MS技術(shù),我們初步
4、鑒定了52個在UU1處理組中表達有變化的蛋白點,其中上調(diào)表達蛋白質(zhì)34個、下調(diào)表達蛋白質(zhì)18個。在這些差異表達蛋白質(zhì)中,我們通過生物信息學(xué)方法查詢后發(fā)現(xiàn),其主要的生物學(xué)功能涉及細胞生理過程的多個方面,包括細胞免疫及防御、細胞內(nèi)蛋白轉(zhuǎn)運、細胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)、細胞周期、細胞形態(tài)發(fā)生、蛋白質(zhì)翻譯、修飾、水解與折疊、蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、RNA聚合酶Ⅱ啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、鈣離子介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)代謝過程相關(guān)、核mRNA剪切及氧化磷酸化等方面。
5、
結(jié)論:
1、通過比較蛋白質(zhì)組學(xué)的方法鑒定出52個差異表達的蛋白質(zhì),提示UU1感染人子宮內(nèi)膜上皮細胞能引起細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的差異表達。
2、通過生物信息學(xué)分析對52個差異蛋白質(zhì)進行了生物信息學(xué)分析,并對其進行了GO注釋,提示UU1感染與細胞免疫及防御、細胞內(nèi)蛋白轉(zhuǎn)運、細胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)、細胞周期、細胞形態(tài)發(fā)生等生物學(xué)過程相關(guān)。
3、篩選了多個與UU1感染相關(guān)的差異蛋白質(zhì),其中熱休克蛋白的表達上升
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