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文檔簡介
1、目的:胚胎著床是復(fù)雜的程序化的生理過程,它包括一系列發(fā)生在胚胎與子宮之間的同步協(xié)調(diào)的變化。著床始于游離子宮上皮細(xì)胞和胚泡之間的識別,進(jìn)行定位并黏著,隨后胚泡的滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞穿透子宮內(nèi)膜的表面,胚泡進(jìn)而植入子宮基質(zhì)。 Lewis Y(LeY)抗原,是雙巖藻糖基化的寡糖[Fucl→2Galβ1→4(Fuc1→3)GlcNAcβ1→R]。LeY抗原主要見于發(fā)育早期的胚胎、內(nèi)皮細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞。FUT4催化了LeY的合成的最后一步反
2、應(yīng),因此是LeY合成的關(guān)鍵酶。 本文主要研究FUT4及LeY寡糖抗原的表達(dá)及其在兩種接受態(tài)子宮內(nèi)膜中的作用的調(diào)控進(jìn)行對比和分析。 方法:本文選取代表高接受態(tài)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞(RL95-2細(xì)胞系)與低接受態(tài)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞(HEC-1A細(xì)胞系),應(yīng)用了RT-PCR、Western Blot方法檢測FUT4在兩種細(xì)胞中的表達(dá)情況;應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),將FUT4過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細(xì)胞,將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細(xì)
3、胞,并在免疫組化實(shí)驗(yàn)中,通過對FUT4的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控后來檢測RL95-2細(xì)胞及HEC-1A中FUT4,LeY的表達(dá)情況;采用細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)分別觀察人胚胎細(xì)胞(JAR cell)與高接受態(tài)和低接受態(tài)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的黏附率,同時將FUT4過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細(xì)胞,將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細(xì)胞,觀測經(jīng)轉(zhuǎn)染FUT4不同質(zhì)粒后的子宮內(nèi)膜細(xì)胞與JAR細(xì)胞的黏附情況,最后分別向兩種細(xì)胞中加入LeY特異性抗體AH6,進(jìn)一步檢測LeY與兩
4、種不同狀態(tài)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的黏附率及表達(dá)情況。 結(jié)果:Western blot、RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示RL95-2細(xì)胞中FUT4的表達(dá)明顯高于HEC-1A細(xì)胞;細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)表明胚胎細(xì)胞(JAR細(xì)胞)與RL95-2細(xì)胞的黏附率高于與HEC-1A細(xì)胞的黏附率;通過將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細(xì)胞,F(xiàn)UT4的表達(dá)下降,與JAR細(xì)胞的黏附率下降;FUT4過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細(xì)胞,F(xiàn)UT4的表達(dá)升高,與JAR細(xì)胞的黏附率升高:經(jīng)
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