LeY寡糖抗原表達(dá)與子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞胚胎接受潛能的研究.pdf

1、目的：胚胎著床是復(fù)雜的程序化的生理過程，它包括一系列發(fā)生在胚胎與子宮之間的同步協(xié)調(diào)的變化。著床始于游離子宮上皮細(xì)胞和胚泡之間的識別，進(jìn)行定位并黏著，隨后胚泡的滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞穿透子宮內(nèi)膜的表面，胚泡進(jìn)而植入子宮基質(zhì)。 Lewis Y（LeY）抗原，是雙巖藻糖基化的寡糖[Fucl→2Galβ1→4（Fuc1→3）GlcNAcβ1→R]。LeY抗原主要見于發(fā)育早期的胚胎、內(nèi)皮細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞。FUT4催化了LeY的合成的最后一步反

2、應(yīng)，因此是LeY合成的關(guān)鍵酶。 本文主要研究FUT4及LeY寡糖抗原的表達(dá)及其在兩種接受態(tài)子宮內(nèi)膜中的作用的調(diào)控進(jìn)行對比和分析。 方法：本文選取代表高接受態(tài)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞（RL95-2細(xì)胞系）與低接受態(tài)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞（HEC-1A細(xì)胞系），應(yīng)用了RT-PCR、Western Blot方法檢測FUT4在兩種細(xì)胞中的表達(dá)情況；應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，將FUT4過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細(xì)胞，將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細(xì)

3、胞，并在免疫組化實(shí)驗(yàn)中，通過對FUT4的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控后來檢測RL95-2細(xì)胞及HEC-1A中FUT4，LeY的表達(dá)情況；采用細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)分別觀察人胚胎細(xì)胞（JAR cell）與高接受態(tài)和低接受態(tài)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的黏附率，同時將FUT4過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細(xì)胞，將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細(xì)胞，觀測經(jīng)轉(zhuǎn)染FUT4不同質(zhì)粒后的子宮內(nèi)膜細(xì)胞與JAR細(xì)胞的黏附情況，最后分別向兩種細(xì)胞中加入LeY特異性抗體AH6，進(jìn)一步檢測LeY與兩

4、種不同狀態(tài)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的黏附率及表達(dá)情況。 結(jié)果：Western blot、RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示RL95-2細(xì)胞中FUT4的表達(dá)明顯高于HEC-1A細(xì)胞；細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)表明胚胎細(xì)胞（JAR細(xì)胞）與RL95-2細(xì)胞的黏附率高于與HEC-1A細(xì)胞的黏附率；通過將FUT4干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至RL95-2細(xì)胞，F(xiàn)UT4的表達(dá)下降，與JAR細(xì)胞的黏附率下降；FUT4過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEC-1A細(xì)胞，F(xiàn)UT4的表達(dá)升高，與JAR細(xì)胞的黏附率升高：經(jīng)