EB病毒感染胃上皮AGS細胞的比較蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)是一種致瘤病毒，已證明多種人類惡性腫瘤如Burkitt's淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌和胃癌等與EBV感染相關。EBV感染能導致一系列的細胞效應，尤其是宿主細胞蛋白質(zhì)合成途徑在病毒侵入后出現(xiàn)明顯變化。因此，在EBV感染和未感染細胞之間就出現(xiàn)了蛋白表達譜的差異，而這些差異蛋白正是病毒感染細胞、細胞抵御病毒的具體執(zhí)行者，尋找并鑒定這些蛋白將對認識EBV感染機制提供大量的研究線索。本研究運用

2、比較蛋白組技術對EBV感染胃上皮AGS細胞前后出現(xiàn)的差異表達蛋白進行分析，初步探索病毒—宿主相互作用，對于進一步闡明EBV的感染機制及EBV在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能的作用和機制具有十分重要的意義。
　　本論文由三部分組成:第一章前言概述了EB病毒感染與胃癌的相關性，以及比較蛋白質(zhì)組學在病毒學的研究現(xiàn)狀。本課題將比較蛋白質(zhì)組學與病毒學相結(jié)合，并提出本課題的研究方向。
　　第二章EB病毒感染的胃上皮AGS細胞系的建立，培養(yǎng)及鑒定:采

3、用cell-to-cell感染法建立EB病毒感染的胃上皮AGS細胞系，并通過原位雜交及電子顯微鏡對EB病毒感染的胃上皮AGS細胞系進行驗證性檢測。原位雜交和電鏡實驗結(jié)果表明:在EB病毒感染的胃上皮AGS細胞的細胞核內(nèi)均可檢測到EBV EBER-1的表達;在EB病毒感染的胃上皮AGS細胞的胞漿內(nèi)存在明確的EB病毒顆粒。
　　第三章EB病毒感染AGS的比較蛋白質(zhì)組學分析為了分析感染病毒后宿主細胞蛋白表達譜的變化，本研究利用蛋白質(zhì)組學技

4、術對EBV感染和未感染的AGS細胞進行了比較蛋白質(zhì)組學分析。結(jié)果顯示，在EBV感染AGS細胞后共有11個蛋白點的表達水平發(fā)生了至少2.0倍的上調(diào)或下調(diào)變化。在這些差異表達蛋白中，我們用質(zhì)譜(MALDI-TOF和LC-ESI-IT MS)成功鑒定出9種蛋白質(zhì)，對應于5個上調(diào)表達和4個下調(diào)表達蛋白質(zhì)。5個上調(diào)表達蛋白質(zhì)是:熱休克同源71 kDa蛋白(heat shock cognate71 kDa protein)，細胞質(zhì)肌動蛋白-1(ac

5、tin cytoplasmic1)，吡多辛-5-磷酸鹽氧化酶(pyridoxine-5'-phosphate oxidase)，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase9)，T復合物蛋白1亞單位α(t-complex protein1 subunit alpha);4個下調(diào)表達蛋白是:鋅指蛋白-2(zinc finger protein2)，細胞周期素依賴性激酶-2（cyclin-dependent kinase2），巨噬細胞加帽蛋白

6、(macrophagecapping protein)，生長分化因子-11（growth/differentiation factor11）。
　　為了檢驗蛋白質(zhì)組研究結(jié)果，我們選取細胞周期素依賴性激酶-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9進行了Western-Blot驗證。結(jié)果顯示:細胞周期素依賴性激酶-2在EBV感染的胃上皮AGS細胞組中下調(diào)表達;同時，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9在EBV感染的胃上皮AGS細胞組中上調(diào)表達。這些結(jié)果表

7、明兩種蛋白的變化趨勢與雙向凝膠電泳中兩種蛋白點變化趨勢一致，進一步證明了本研究的蛋白組學結(jié)果正確。
　　在我們所發(fā)現(xiàn)的差異蛋白中，下調(diào)表達的細胞周期素依賴性激酶-2是細胞周期中的重要調(diào)控因子之一，我們推測:EBV可能通過改變細胞周期調(diào)控，引起細胞周期紊亂，而導致細胞惡性增殖。上調(diào)表達的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9是細胞凋亡的重要的起始因子。我們推測:EBV感染AGS細胞以后，細胞凋亡的調(diào)節(jié)可能是宿主細胞對病毒的防御機制之一。