豬圓環(huán)病毒2型感染豬肺泡巨噬細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)感染主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合癥，還可引發(fā)肺炎，同時(shí)對(duì)豬的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生影響，能誘導(dǎo)仔豬的免疫抑制。而豬肺泡巨噬細(xì)胞(porcine alveolar macrophage,PAM)不僅是豬圓環(huán)病毒2型的靶細(xì)胞，而且是一種重要的免疫細(xì)胞，具有抗原遞呈、產(chǎn)生細(xì)胞因子、吞噬外來(lái)病原微生物的功能。因此，研究PCV2與豬肺泡巨噬細(xì)胞的互作以及PCV2感染PAM后的蛋白

2、質(zhì)組水平的變化，將有助于闡明PCV2的致病機(jī)理。
　　 本研究以豬肺泡巨噬細(xì)胞3D4/21細(xì)胞系為模型，通過(guò)對(duì)感染PCV2WH株3D4/21細(xì)胞的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，試圖從細(xì)胞和蛋白質(zhì)水平探討豬圓環(huán)病毒2型的致病機(jī)理。
　　 應(yīng)用雙向凝膠電泳結(jié)合質(zhì)譜鑒定的方法，對(duì)PCV2感染的PAM細(xì)胞差異蛋白進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)分析顯示，在PCV2感染PAM后的不同時(shí)間點(diǎn)，共有58個(gè)差異表達(dá)蛋白被發(fā)現(xiàn)，主要的差異表達(dá)蛋白出現(xiàn)在PAM感染后2

3、4-48h。經(jīng)MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜分析，共成功的鑒定出32個(gè)差異表達(dá)蛋白，包括14個(gè)上調(diào)表達(dá)蛋白和18個(gè)下調(diào)表達(dá)蛋白。其中，PCV2感染PAM后24h上調(diào)蛋白有：醛脫氫酶9A1、前mRNA加工因子19、微絲相關(guān)蛋白，下調(diào)蛋白有：多聚腺苷酸結(jié)合蛋白、磷脂結(jié)合蛋白、含有EF-H結(jié)構(gòu)域的蛋白D2、蛋白酶體激活復(fù)合物亞型1、蛋白酶體β亞基、熱休克蛋白β-1；PCV2感染PAM后48h上調(diào)蛋白有：t-復(fù)合多肽1、分子伴侶Erp和Tapa

4、sin二聚體、谷氨酰胺酶、α-烯醇化酶、線粒體鳥(niǎo)氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、TarDNA結(jié)合蛋白、中間絲相關(guān)蛋白、酸性核蛋白體磷蛋白P0、微管蛋白、真核細(xì)胞起始因子5A、CLIC蛋白4，下調(diào)蛋白有：微絲相關(guān)蛋白、增殖細(xì)胞核抗原、中間絲相關(guān)蛋白、前mRNA剪接因子、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、精氨酸酶、磷脂結(jié)合蛋白；PCV2感染PAM后96h下調(diào)蛋白有：微絲相關(guān)蛋白tropomyosin-3、14-3-3蛋白。這些差異蛋白主要涉及細(xì)胞骨架蛋白，生物大分子合成