miR-182對奶山羊子宮內(nèi)膜上皮細胞中HOXA10基因的靶向調(diào)控作用研究.pdf

1、MiR-182對動物的生長和發(fā)育具有調(diào)控作用，而HOXA10在胚胎植入過程有著重要的調(diào)節(jié)功能，生物信息學分析表明，miR-182可能靶向調(diào)控HOXA10。因此研究miR-182對奶山羊子宮內(nèi)膜上皮細胞(EEC)中HOXA10基因的調(diào)控作用，有助于進一步闡明胚胎著床的分子機理。
　　本研究以關(guān)中奶山羊為研究對象，首先檢測miR-182和HOXA10在容受期和非容受期子宮內(nèi)膜的表達，然后分析miR-182對HOXA10的靶向調(diào)控作用，

2、最后檢測miR-182對EEC的調(diào)控作用，主要研究結(jié)果如下:
　　1.利用RT-qPCR技術(shù)分別檢測miR-182和HOXA10在容受期和非容受期子宮內(nèi)膜的表達。結(jié)果表明，miR-182和HOXA10在容受期子宮內(nèi)膜的表達均極顯著高于(P＜0.01)非容受期子宮內(nèi)膜的表達。
　　2.利用雙熒光素酶報告載體、RT-qPCR以及Western blot等檢測技術(shù)，檢測miR-182對HOXA10的調(diào)控作用。結(jié)果表明，將miRNA

3、模擬物與HOXA10雙熒光素酶報告載體共轉(zhuǎn)后，發(fā)現(xiàn)miR-182mimic組熒光素酶活性極顯著低于NC對照組(P＜0.01);而突變型各組熒光素酶活性均差異不顯著，表明miR-182可與HOXA10基因3'UTR區(qū)的靶位點結(jié)合，驗證HOXA10為miR-182的靶基因。RT-qPCR以及Western blot結(jié)果顯示，miR-182在mRNA水平和蛋白水平均抑制了HOXA10的表達。
　　3.利用Western blot及細胞周