MiR-217對乳腺癌上皮細胞甲基化關(guān)鍵基因調(diào)控作用的研究.pdf

1、目的:探討在人乳腺癌上皮細胞系中,miR-217通過直接作用于DNMT1與EZH23′UTR調(diào)控DNMT1及EZH2轉(zhuǎn)錄后表達水平,為后期動物實驗和臨床試驗提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法:首先利用實時定量PCR技術(shù),檢測 HBL-100、MCF-7和 MDA-MB-231三株人乳腺上皮細胞系中miR-217和EZH2轉(zhuǎn)錄后表達水平;利用Western blot技術(shù)檢測三株細胞系中EZH2蛋白表達水平;篩選用于“過表達、抑制miR-217

2、實驗”的細胞。然后利用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù),在低表達miR-217細胞中,轉(zhuǎn)染miR-217模擬物;在高表達miR-217細胞中,轉(zhuǎn)染miR-217抑制物,進行miR-217的過表達、抑制實驗。最后,將含有miR-217野生型及突變型識別位點的DNMT1及EZH23′UTR質(zhì)粒載體,分別轉(zhuǎn)染293T細胞,檢測其相對熒光素酶活性的改變。
　　結(jié)果:RT-PCR結(jié)果顯示,與正常乳腺上皮細胞系HBL-100比較,EZH2在乳腺癌上皮細胞系MCF

3、-7和MDA-MB-231中顯著高表達(P<0.05);而miR-217顯著低表達(P<0.05)。Western blot檢測結(jié)果顯示,EZH2在正常乳腺上皮細胞系HBL-100中低表達,乳腺癌上皮細胞系MCF-7、MDA-MB-231中高表達。三陰性乳腺癌上皮細胞系MDA-MB-231中過表達miR-217,DNMT1和EZH2蛋白表達下降;乳腺上皮細胞系HBL-100中抑制miR-217表達,DNMT1和EZH2蛋白表達增高。29