多基因甲基化水平調(diào)控的乳腺癌MCF-7對(duì)他莫昔芬敏感性探究.pdf

1、目的：
　　尋找ER/PR(+)乳腺癌MCF-7耐他莫昔芬(TAM)細(xì)胞株相關(guān)的抑癌基因CpG島啟動(dòng)子甲基化異常狀態(tài),篩選出能夠預(yù)測 MCF-7對(duì)他莫昔芬敏感性相關(guān)的關(guān)鍵基因，為抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)域異常甲基化作為預(yù)測臨床內(nèi)分泌治療敏感性方法提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.用噻唑藍(lán)比色法（MTT）法對(duì)比檢測 MCF-7/TAM耐藥倍數(shù)及乳腺癌 MCF-7細(xì)胞株與耐藥株MCF-7/TAM生長增殖差異。
　　2.流式

2、細(xì)胞術(shù)(FCM)對(duì)比兩細(xì)胞株生長周期及凋亡率之間差異。
　　3.RT-PCR和real-time PCR檢測親本與耐藥細(xì)胞株MCF-7/TAM相關(guān)基因（DAPK、RASSF1A、MGMT、P53、DNMT1、 DNM3B、DNMT3A）的mRNA表達(dá)差異。4.MS-PCR檢驗(yàn)候選基因（DAPK、MGMT、P53、RASSF1A）在 MCF-7及MCF-7/TAM中的啟動(dòng)子甲基化水平。
　　結(jié)果：
　　1.MTT顯示:4

3、8h MCF/TAM的IC50值為(17.92?0.03)μmol/L，耐藥倍數(shù)為2.63（t=51.20,P<0.05）MCF/TAM細(xì)胞株增殖水平較高（t=4.472，P<0.001）。
　　2.流式分析：MCF-7較MCF-7/TAM細(xì)胞株Gl期的部分阻滯，生長抑制，凋亡率較高。
　　3.real-time PCR顯示:MCF-7/TAM細(xì)胞株中基因DAPK（Z=-2.087，P<0.05）、RASSF1A（Z=-4.

4、123，P<0.001）mRNA表達(dá)水平低于親本MCF-7細(xì)胞株；而基因P53（Z=10.378，P<0.001）、MGMT（Z=42.378，P<0.001）、DNMT1（Z=19.378，P<0.001）、 DNM3B（Z=9.378，P<0.001）的 mRNA表達(dá)水平高于MCF-7細(xì)胞株；基因DNMT3A的 mRNA表達(dá)水平過低，在耐藥株與親本細(xì)胞株中均未能檢出。
　　4..MSP顯示，在MCF-7/TAM細(xì)胞株中，基因D

5、APK、P53、RASSF1A啟動(dòng)子為甲基化狀態(tài)；而親本細(xì)胞株中基因 DAPK、P53、RASSF1A啟動(dòng)子為非甲基化狀態(tài);MCF-7/TAM細(xì)胞株中MGMT去甲基化水平增高，結(jié)合real-time PCR各基因mRNA表達(dá)水平檢測，可見，各基因表達(dá)水平與其啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)性，基因P53表達(dá)水平與甲基化狀態(tài)不一致，可能還受其他因素調(diào)控。
　　結(jié)論：
　　1.乳腺癌MCF-7/TAM細(xì)胞株存在多種基因啟動(dòng)子甲基化現(xiàn)象。