抑制Dicer基因?qū)θ橄侔┘毎鸐CF-7周期和藥物敏感性的影響.pdf

1、Dicer是microRNA(miRNA)合成過程中的重要酶類，參與miRNA的剪切和成熟。目前研究已經(jīng)證實了多種miRNA參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程，一些腫瘤中亦可見Dicer的異常表達，但Dicer在其中所起的作用不清。本研究擬通過RNA技術(shù)干擾Dicer基因的表達，觀察乳腺癌細胞系MCF—7生物學特性及細胞對順鉑Platinum藥物敏感性的改變，探討Dicer對腫瘤細胞增殖和藥物敏感性的影響，為提高乳腺癌治療效果提供理論指導(dǎo)。合成

2、帶有熒光標記、特異性干擾Dicer基因的siRNA序列，應(yīng)用脂質(zhì)體lipofectamine2000轉(zhuǎn)染乳腺癌細胞MCF—7，半定量RT-PCR檢測不同時間點的轉(zhuǎn)染效率并用Western blot方法驗證。在干擾效率最高的時間點，流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后MCF—7細胞周期的變化，XTT法評價轉(zhuǎn)染前后細胞對不同濃度化療藥物順鉑(Platinum)生長抑制率的變化。RT-PCR檢測MCF—7內(nèi)miR—21表達量的變化，Western blot檢

3、測和細胞周期相關(guān)的蛋白p21、p27、CDK2、CDK4表達量的變化。通過實驗我們發(fā)現(xiàn)，siRNA序列能特異性的抑制MCF—7細胞Dicer的表達，轉(zhuǎn)染后48小時抑制效果最明顯，此時細胞出現(xiàn)明顯的G1期阻滯，轉(zhuǎn)染后MCF—7細胞在順鉑濃度為2.5μM、5.0μM、10μM的劑量下藥物敏感性提高。進一步研究發(fā)現(xiàn)siRNA轉(zhuǎn)染組p21，p27的蛋白表達升高，在乳腺癌中發(fā)揮癌在基因作用的miR—21明顯減少。由此我們得出結(jié)論，干擾Dicer基