散發(fā)性乳腺癌相關(guān)基因甲基化及影響因素分析.pdf

1、乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤，近年研究認(rèn)為表遺傳學(xué)改變在散發(fā)性乳腺癌發(fā)病機(jī)制中占有重要地位。DNMT和HDAC是表遺傳學(xué)改變中的兩種重要酶類，與基因甲基化有著密切的關(guān)系。乳腺癌易感基因BRCA1與乳腺癌關(guān)系密切，基因突變，啟動子甲基化和等位基因雜合性缺失是其基因失表達(dá)的常見方式。在散發(fā)性乳腺癌中，BRCA1基因啟動子甲基化以及BRCA1基因缺失較為常見。
　　 材料與方法：
　　 一、病例組織標(biāo)本
　　 收集中

2、國醫(yī)科大學(xué)外科2006年1月-2010年1月間經(jīng)病理診斷明確的散發(fā)性乳腺癌手術(shù)切除標(biāo)本292例，患者均為女性。臨床分期按1997年國際抗癌聯(lián)盟TNM分期。同期收集乳腺纖維腺瘤組織44例。所有患者術(shù)前均末接受化療、放療及其他抗癌治療。
　　 二、試劑
　　 兔抗人DNMT3a、DNMT3b、HDACl、HDAC2抗體均購為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品，兔抗人DNMT1多克隆抗體購自美國Abcam公司，U1traSens

3、itive TM S-P超敏濃縮（兔）試劑盒（KIT-0100R），購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；核酸凝膠回收試劑盒購自O(shè)mega Bio-tek公司，Cy3標(biāo)記試劑盒購自美國Mirus生物公司，去離子甲酰胺購自美國Amresco公司，硫酸葡聚糖購自Pharmacia公司，DAPI購自Roche公司。
　　 三、方法
　　 應(yīng)用免疫組化法檢測292例散發(fā)性乳腺癌與44例乳腺纖維腺瘤組織中DNMT1、DNMT3a、DN

4、MT3b和HDAC1、HDAC2蛋白的表達(dá)情況，應(yīng)用熒光原位雜交法檢測100例散發(fā)性乳腺癌及19例乳腺纖維腺瘤中BRCA1基因拷貝數(shù)，并對上述結(jié)果與乳腺癌臨床病理特點之間的關(guān)系進(jìn)行分析。
　　 四、統(tǒng)計學(xué)處理
　　 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包處理數(shù)據(jù)。DNMTl、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1、HDAC2各指標(biāo)與臨床病理參數(shù)相關(guān)性采用Pearson卡方檢驗，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。BRCA1基因拷貝數(shù)與B

5、RCA1基因啟動子甲基化狀態(tài)及BRCA1蛋白表達(dá)及臨床病例資料等指標(biāo)之間的相關(guān)性采用獨立樣本t檢驗，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 一、免疫組織化學(xué)
　　 DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1、HDAC2在乳腺癌和纖維腺瘤組織中表達(dá)均無顯著差異。DNMT1和HDAC2在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中表達(dá)顯著高于未轉(zhuǎn)移組（P=0.024、0.030）不同組織類型乳腺癌的HDAC2表達(dá)存在顯

6、著差異，以浸潤性導(dǎo)管癌陽性率最高（P=0.007）。在ER β表達(dá)陽性的組織中，HDAC1、HDAC2及DNMT3a表達(dá)顯著增高（P=0.001、0.009、0.006）；DNMT3b則與BRCA1蛋白的表達(dá)呈顯著的正相關(guān)性（P=0.020）；HER2陽性組的DNMT3a陽性表達(dá)顯著高于HER2陰性組（P=0.033）；HDAC2與HER2、p53、c-Myc三種重要蛋白的表達(dá)均呈顯著的正相關(guān)性（P=0.007、0.028、0.002）

7、MRP陽性表達(dá)的組織中，HDAC1表達(dá)顯著增高（P=0.002），BCRP陽性表達(dá)的組織中，HDAC2表達(dá)顯著增高（P=0.041）。
　　 二、熒光原位雜交
　　 乳腺癌組織的BRCA1基因拷貝數(shù)為2.02±0.63（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n=100），乳腺纖維腺瘤組織的BRCA1基因拷貝數(shù)為1.844±0.44（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n=19），二者相比較乳腺癌組織的BRCA1基因拷貝數(shù)高于乳腺纖維腺瘤組織，但差別不具有統(tǒng)計學(xué)意

8、義。在BRCA1啟動子甲基化的乳腺癌組織中，BRCA1基因拷貝數(shù)為1.534±0.74（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n=15），非甲基化組的BRCA1基因拷貝數(shù)為2.08±0.48（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n=23），甲基化組的BRCA1基因拷貝數(shù)顯著低于非甲基化組（P：0.008）：在BRCA1蛋白表達(dá)陰性的乳腺癌組織中，BRCA1基因拷貝數(shù)為1.764±0.63（平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n=32），蛋白表達(dá)陽性組的BRCA1基因拷貝數(shù)為2.074±0.54（平

9、均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，n=57），BRCA1蛋白表達(dá)陰性組的BRCA1基因拷貝數(shù)顯著低于陽性組（P=0.020）。BRCA1基因拷貝數(shù)與散發(fā)性乳腺癌病理特征之間的關(guān)系，只能看到部分趨勢，不具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1、HDAC2高表達(dá)與女性散發(fā)性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展以及產(chǎn)生耐藥之間有著一定的聯(lián)系；其中HDAC2的作用較為明顯。在散發(fā)性乳腺癌中，BRCA1基因啟動子發(fā)生甲基化