散發(fā)性乳腺癌相關基因甲基化及影響因素分析.pdf

1、乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤，近年研究認為表遺傳學改變在散發(fā)性乳腺癌發(fā)病機制中占有重要地位。DNMT和HDAC是表遺傳學改變中的兩種重要酶類，與基因甲基化有著密切的關系。乳腺癌易感基因BRCA1與乳腺癌關系密切，基因突變，啟動子甲基化和等位基因雜合性缺失是其基因失表達的常見方式。在散發(fā)性乳腺癌中，BRCA1基因啟動子甲基化以及BRCA1基因缺失較為常見。
　　 材料與方法：
　　 一、病例組織標本
　　 收集中

2、國醫(yī)科大學外科2006年1月-2010年1月間經病理診斷明確的散發(fā)性乳腺癌手術切除標本292例，患者均為女性。臨床分期按1997年國際抗癌聯盟TNM分期。同期收集乳腺纖維腺瘤組織44例。所有患者術前均末接受化療、放療及其他抗癌治療。
　　 二、試劑
　　 兔抗人DNMT3a、DNMT3b、HDACl、HDAC2抗體均購為美國Santa Cruz公司產品，兔抗人DNMT1多克隆抗體購自美國Abcam公司，U1traSens

3、itive TM S-P超敏濃縮（兔）試劑盒（KIT-0100R），購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司；核酸凝膠回收試劑盒購自Omega Bio-tek公司，Cy3標記試劑盒購自美國Mirus生物公司，去離子甲酰胺購自美國Amresco公司，硫酸葡聚糖購自Pharmacia公司，DAPI購自Roche公司。
　　 三、方法
　　 應用免疫組化法檢測292例散發(fā)性乳腺癌與44例乳腺纖維腺瘤組織中DNMT1、DNMT3a、DN

4、MT3b和HDAC1、HDAC2蛋白的表達情況，應用熒光原位雜交法檢測100例散發(fā)性乳腺癌及19例乳腺纖維腺瘤中BRCA1基因拷貝數，并對上述結果與乳腺癌臨床病理特點之間的關系進行分析。
　　 四、統(tǒng)計學處理
　　 應用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包處理數據。DNMTl、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1、HDAC2各指標與臨床病理參數相關性采用Pearson卡方檢驗，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。BRCA1基因拷貝數與B

5、RCA1基因啟動子甲基化狀態(tài)及BRCA1蛋白表達及臨床病例資料等指標之間的相關性采用獨立樣本t檢驗，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 一、免疫組織化學
　　 DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1、HDAC2在乳腺癌和纖維腺瘤組織中表達均無顯著差異。DNMT1和HDAC2在發(fā)生淋巴結轉移的癌組織中表達顯著高于未轉移組（P=0.024、0.030）不同組織類型乳腺癌的HDAC2表達存在顯

6、著差異，以浸潤性導管癌陽性率最高（P=0.007）。在ER β表達陽性的組織中，HDAC1、HDAC2及DNMT3a表達顯著增高（P=0.001、0.009、0.006）；DNMT3b則與BRCA1蛋白的表達呈顯著的正相關性（P=0.020）；HER2陽性組的DNMT3a陽性表達顯著高于HER2陰性組（P=0.033）；HDAC2與HER2、p53、c-Myc三種重要蛋白的表達均呈顯著的正相關性（P=0.007、0.028、0.002）

7、MRP陽性表達的組織中，HDAC1表達顯著增高（P=0.002），BCRP陽性表達的組織中，HDAC2表達顯著增高（P=0.041）。
　　 二、熒光原位雜交
　　 乳腺癌組織的BRCA1基因拷貝數為2.02±0.63（平均數±標準差，n=100），乳腺纖維腺瘤組織的BRCA1基因拷貝數為1.844±0.44（平均數±標準差，n=19），二者相比較乳腺癌組織的BRCA1基因拷貝數高于乳腺纖維腺瘤組織，但差別不具有統(tǒng)計學意

8、義。在BRCA1啟動子甲基化的乳腺癌組織中，BRCA1基因拷貝數為1.534±0.74（平均數±標準差，n=15），非甲基化組的BRCA1基因拷貝數為2.08±0.48（平均數±標準差，n=23），甲基化組的BRCA1基因拷貝數顯著低于非甲基化組（P：0.008）：在BRCA1蛋白表達陰性的乳腺癌組織中，BRCA1基因拷貝數為1.764±0.63（平均數±標準差，n=32），蛋白表達陽性組的BRCA1基因拷貝數為2.074±0.54（平

9、均數±標準差，n=57），BRCA1蛋白表達陰性組的BRCA1基因拷貝數顯著低于陽性組（P=0.020）。BRCA1基因拷貝數與散發(fā)性乳腺癌病理特征之間的關系，只能看到部分趨勢，不具有統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1、HDAC2高表達與女性散發(fā)性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展以及產生耐藥之間有著一定的聯系；其中HDAC2的作用較為明顯。在散發(fā)性乳腺癌中，BRCA1基因啟動子發(fā)生甲基化