甘草甜素對人工誘導(dǎo)小鼠乳腺炎的免疫保護(hù)效應(yīng)研究.pdf

1、奶牛乳腺炎至今不僅對奶牛業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而且由于治療過程中抗生素的廣泛應(yīng)用，給人類的健康帶來嚴(yán)重的、現(xiàn)實(shí)的和潛在的危害。 為了進(jìn)一步認(rèn)識奶牛乳腺炎發(fā)生的免疫病理機(jī)制和尋找更理想的防治方法提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)，本試驗(yàn)對保定地區(qū)5個奶牛場臨床型奶牛乳腺炎的病原進(jìn)行了分離鑒定；并用分離到的金黃色葡萄球菌建立了小鼠實(shí)驗(yàn)性乳腺炎模型，觀察和分析了乳腺炎模型的局部及整體的臨床表現(xiàn)和免疫病理變化；探討了甘草甜素對小鼠實(shí)驗(yàn)性乳腺炎，乳腺局部和

2、整體病理機(jī)制及免疫功能的影響。 結(jié)果表明：將43份臨床型乳腺炎奶樣進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，生化結(jié)果表明共分離到10種91株細(xì)菌，以金黃色葡萄球菌(21.98％)、鏈球菌(19.78％)、大腸桿菌(19.78％)感染為主。小鼠實(shí)驗(yàn)性乳腺炎模型，以細(xì)菌菌落數(shù)(Colony-Forming Units，CFU)為接菌單位，將雌孕鼠分為正常對照組、生理鹽水組及1.0×10<,2>CFU/50uL、4.0×10<'2>CFe/50μL、 7.0

3、×10<'2>CFU/50μL、1.0×10<'3>CFU/50μL、1.0×10<'4>CFU/50μL不同濃度金黃色葡萄球菌懸液組，產(chǎn)后8～10d經(jīng)乳頭管注入到小鼠的第4對(腹部)乳腺內(nèi)，24h觀察炎癥反應(yīng)。結(jié)果7.0x10<'2>CFU/50μL，金葡菌組乳腺上皮脫落，腺泡腔內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤，以嗜中性白細(xì)胞為主，充血，腺泡內(nèi)空泡減少，腺泡分泌量減少，間隔增寬，炎癥明顯。而隨著金黃色葡萄球菌用量的加大，乳腺組織的炎癥程度加劇。間質(zhì)

4、寬度、TNF-α及IFN-γ含量與對照組相比極顯著升高(P<0.01)，金葡菌在乳腺組織內(nèi)大量繁殖，CFU急劇增加。小鼠體溫升高、臨床表現(xiàn)等全身癥狀以及病理變化真實(shí)反映了急性乳腺炎自然發(fā)病過程，因此選擇7.0×10<'2>CFU/50μL金葡菌繼續(xù)下面的試驗(yàn)。甘草甜素對小鼠實(shí)驗(yàn)性乳腺炎的影響，將受孕雌鼠隨機(jī)分成正常對照組、陽性對照組和試驗(yàn)組。正常對照組于產(chǎn)后8～10d經(jīng)乳頭管注入50μL滅菌生理鹽水；陽性對照組和試驗(yàn)組小鼠分別于產(chǎn)后8～

5、10d經(jīng)乳頭管注入50μL7.0×10<'2>CFU細(xì)菌懸液人工發(fā)病。分別于接菌-12h、0h、12h、36h時，正常對照組和陽性對照組腹腔注射滅菌生理鹽水0.2mL，試驗(yàn)組分成3個劑量組，將甘草甜素分別配制成2.2 mg/mL、4.4 mg/mL、8.8 mg/mL，三個劑量，分別腹腔注射甘草甜素溶液0.2mL。分別于接菌后6h、18h、42h、66h脫頸致死。取乳腺組織固定，進(jìn)行組織病理學(xué)觀察及間質(zhì)寬度的測定，甲苯胺藍(lán)染色觀察乳腺肥

6、大細(xì)胞的變化，取乳腺勻漿液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測TNF-α及IFN-γ含量變化。結(jié)果甘草甜素各組小鼠精神狀態(tài)良好、體溫平穩(wěn)，能夠抑制金葡菌在乳腺組織內(nèi)繁殖，顯著降低CFU(P<0.01)，因而減少了對乳腺組織的刺激，病理變化減輕，間質(zhì)寬度縮小，充血減輕。 甘草甜素不同劑量組肥大細(xì)胞數(shù)在感染6～42h與生理鹽水組、陽性對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，且組間無差異性(P>0.05)，但甘草甜素組脫顆粒肥大細(xì)

7、胞少于陽性對照組，數(shù)據(jù)表明甘草甜素能夠很好地抑制肥大細(xì)胞脫顆粒。ELISA試驗(yàn)結(jié)果顯示甘草甜素顯著降低乳腺內(nèi)TNF-α和IFN-γ的濃度，且呈劑量依賴性，但高于正常對照組。甘草甜素調(diào)節(jié)乳腺內(nèi)TNF-α和IFN-γ水平在一定范圍內(nèi)，即參與機(jī)體免疫反應(yīng)又控制組織的過度炎癥。 結(jié)論：保定地區(qū)5個奶牛場臨床型乳腺炎其病原體以金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌感染為主；用金黃色葡萄球菌建立的小鼠實(shí)驗(yàn)性乳腺炎模型其局部等癥狀和病理機(jī)制與自然感