IL-21、IL-2對口腔癌患者外周血T淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子表達(dá)的影響及臨床意義.pdf

1、目的:目前,口腔癌的治療仍是以手術(shù)為主,并輔以局部放療和全身化療的綜合治療,但手術(shù)造成的功能障礙和外貌畸形對患者來說是不愿承受的,而放化療對患者機(jī)體也存在著嚴(yán)重的毒副作用。因此研究針對口腔癌患者的免疫治療具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。目前臨床上已應(yīng)用IL-2、CSF、IFN、TNF-α等治療腫瘤。IL-21是IL-2家族中的新成員,在結(jié)構(gòu)上和功能上與IL-2類似,具有持久增強(qiáng)效應(yīng)T細(xì)胞及活化NK細(xì)胞的功能,并且以沒有劑量依賴性的毒副作用而優(yōu)于

2、IL-2。因此,IL-21日益受到人們的關(guān)注,其最具潛力的應(yīng)用前景在于腫瘤的生物治療領(lǐng)域。本試驗(yàn)采用IL-21、IL-2單獨(dú)或聯(lián)合刺激口腔癌患者外周全血細(xì)胞,觀察T淋巴細(xì)胞內(nèi)IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ,+分泌水平的變化及其時間依賴性,探討IL-21、IL-2單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對口腔癌患者機(jī)體抗腫瘤免疫功能的影響,為IL-21應(yīng)用于口腔癌的免疫治療提供試驗(yàn)性理論依據(jù)。
　　 方法:抽取晨起空腹

3、靜脈肝素抗凝血3ml,與含10％滅活新生小牛血清,100U/ml青霉素和100ug/ml鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基按1:1比例加入24微孔培養(yǎng)板,設(shè)空白對照組和試驗(yàn)組,對照組不加入任何細(xì)胞因子,試驗(yàn)組依照加入細(xì)胞因子的不同分為A、B、C組。A:IL-2組,B:IL-21組、C:IL-2+IL-21組。(細(xì)胞因子用量:IL-21000U/ml,IL-2115ng/m1),各組在37℃、5％CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng),選取24h、48h

4、兩個作用時間點(diǎn),以流式細(xì)胞儀分別測定各組全血培養(yǎng)細(xì)胞中T淋巴細(xì)胞內(nèi)IL-2+、IFN-γ+T淋巴細(xì)胞所占的比例及CD4+/IL-2+CD4+/IFN-γ+T淋巴細(xì)胞所占的比例,以觀察其分泌水平的變化及其時間依賴性。
　　 結(jié)果:
　　 1培養(yǎng)后各組T淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子分析結(jié)果
　　 1.1 IL-2+的表達(dá):24小時空白對照組T淋巴細(xì)胞內(nèi)IL-2+T淋巴細(xì)胞所占的比例為1.2313±0.1703％,而A、B、C三

5、組分別為3.0590±0.3897％、3.2043±0.5345％、3.1740±0.4612％,48小時對照組為1.2486±0.0964％,試驗(yàn)組分別為6.2083±1.2570％、4.7463±0.6297％、5.3133±1.0607％,在兩個檢測時間點(diǎn),各試驗(yàn)組比對照組IL-2+T淋巴細(xì)胞比例均有顯著提高,(P＜0.05),而A、B、C三組間均無明顯差異(P＞0.05)。
　　 1.2 IFN-γ+的表達(dá):24小時空白

6、對照組T淋巴細(xì)胞內(nèi)IFN-γ+T淋巴細(xì)胞所占的比例為1.0033±0.0919％,而A、B、C三組分別為2.6447±0.3484％、2.5103±0.2728％、2.5390±0.2691％,48小時對照組為1.0128±0.1025％,試驗(yàn)組分別為5.9977±0.9969％、5.6327±1.121％、5.5280±0.8846％,在兩個檢測時間點(diǎn),各試驗(yàn)組比對照組IFN-γ+T淋巴細(xì)胞比例均有顯著提高(P＜0.05),而A、B、

7、C三組間均無明顯差異(P＞0.05)。
　　 1.3 CD4+/IL-2+的表達(dá):24小時空白對照組T淋巴細(xì)胞內(nèi)CD4+/IL-2+T淋巴細(xì)胞所占的比例為0.6670±0.1096％,而A、B、C三組分別為2.2660±0.3767％、2.3727±0.3341％、2.4577±0.3828％,48小時對照組為0.6738±0.0917％,試驗(yàn)組分別為5.5490±1.0036％、4.7463±0.6297％、5.2780±0.

8、8209％,在兩個檢測時間點(diǎn),各試驗(yàn)組比對照組CD4+/IL-2+T淋巴細(xì)胞比例均有顯著提高(P＜0.05),而A、B、C三組間均無明顯差異(P＞0.05)。
　　 1.4 CD4+/IFN-γ+的表達(dá):24小時空白對照組T淋巴細(xì)胞內(nèi)CD4+/IFN-γ+T淋巴細(xì)胞所占的比例為0.5033±0.0846％,而A、B、C三組分別為1.4853±0.2079％、1.4027±0.1747％、1.6113±0.2101％,48小時對照

9、組為0.5128±0.0735％,試驗(yàn)組分別為4.7390±0.5536％、5.0293±0.7189％、5.2777±0.8083％,在兩個檢測時間點(diǎn),各試驗(yàn)組比對照組CD4+/IFN-γ+T淋巴細(xì)胞比例均有顯著提高(P＜0.05),而A、B、C三組間均無明顯差異(P＞0.05)。
　　 2各試驗(yàn)組培養(yǎng)前、培養(yǎng)24小時與培養(yǎng)48小時檢測結(jié)果比較2.1IL-2+的變化:各組培養(yǎng)后較培養(yǎng)前IL-2+的表達(dá)均有顯著增強(qiáng)(P＜0.05

10、),而培養(yǎng)后兩個時間點(diǎn)比較,A組中培養(yǎng)48小時較24小時IL-2+的表達(dá)增強(qiáng),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。B組和C組中培養(yǎng)48小時較24小時IL-2+的表達(dá)雖有增強(qiáng),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.2 IFN-γ+的變化:各組培養(yǎng)后較培養(yǎng)前IFN-γ+的表達(dá)均有顯著增強(qiáng)(P＜0.05),而培養(yǎng)后兩個時間點(diǎn)比較,A、B、C三組中培養(yǎng)48小時較24小時IFN-γ+的表達(dá)均有顯著增強(qiáng),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

11、>　　 2.3 CD4+/IL-2+的變化:各組培養(yǎng)后較培養(yǎng)前CD4+/IL-2+T的表達(dá)均有顯著增強(qiáng)(P＜0.05),而培養(yǎng)后兩個時間點(diǎn)比較,A、B、C三組中培養(yǎng)48小時較24小時CD4+/IL-2+的表達(dá)均顯著增強(qiáng),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.4 CD4+/IFN-γ+的變化:各組培養(yǎng)后較培養(yǎng)前CD4+/IFN-γ+的表達(dá)均有顯著增強(qiáng)(P＜0.05),而培養(yǎng)后兩個時間點(diǎn)比較,A、B、C三組中培養(yǎng)48小時較24

12、小時CD4+/IFN-γ+的表達(dá)均顯著增強(qiáng),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3 IL-21、IL-2單獨(dú)或聯(lián)合刺激后T淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子表達(dá)的增強(qiáng)效果與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期的關(guān)系
　　 3.1 IL-2刺激組
　　 3.1.1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系:無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組培養(yǎng)48小時后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果均高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。其中CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效

13、果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+的增強(qiáng)效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.1.2與臨床分期的關(guān)系:臨床Ⅰ、Ⅱ期組培養(yǎng)48小時后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果均高于臨床Ⅲ、Ⅳ期組。其中IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),CD4+/IL-2+的增強(qiáng)效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05

14、)。
　　 3.2 IL-21刺激組
　　 3.2.1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系:無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組培養(yǎng)48小時后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2、CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果均高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。其中IL-2+、WN4-γ+的增強(qiáng)效果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.2.2與臨床分期的關(guān)系:臨床Ⅰ、Ⅱ期組培養(yǎng)48小時

15、后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果均高于臨床Ⅲ、Ⅳ期組。其中IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),CD4+/IL-2+的增強(qiáng)效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.3 IL-21聯(lián)合IL-2刺激組
　　 3.3.1與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系:無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組培養(yǎng)48小時后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/

16、IFN-γ+的增強(qiáng)效果均高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。其中CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+的增強(qiáng)效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.3.2與臨床分期的關(guān)系:臨床Ⅰ、Ⅱ期組培養(yǎng)48小時后IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+、CD4+/IFN-γ+的增強(qiáng)效果均高于臨床Ⅲ、Ⅳ期組。其中IL-2+、IFN-γ+的增強(qiáng)效果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),C

17、D4+/IFN-γ+、CD4+/IL-2+的增強(qiáng)效果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1單獨(dú)應(yīng)用IL-21、IL-2或二者聯(lián)合應(yīng)用,均能增強(qiáng)口腔癌患者T淋巴細(xì)胞內(nèi)IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+和CD4+/IFN-γ+的表達(dá),提示應(yīng)用IL-21、IL-2可能增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫功能。
　　 2 IL-2l與IL-2在影響口腔癌患者T淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子分泌水平方面并無明顯差異,提示I

18、L-21有作為IL-2替代品的潛力。
　　 3在增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫功能方面,IL-21與IL-2之間無明顯協(xié)同作用。
　　 4 IL-21、IL-2刺激下口腔癌患者T淋巴細(xì)胞內(nèi)IL-2+、IFN-γ+、CD4+/IL-2+和CD4+/IFN-γ+的表達(dá)存在時間依賴性,提示IL-21、IL-2對機(jī)體抗腫瘤免疫功能的影響隨時間的延長而有所增強(qiáng)。
　　 5 IL-21、IL-2單獨(dú)或聯(lián)合刺激后機(jī)體抗腫瘤免疫功能的增強(qiáng)