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文檔簡介
1、該實驗的目的就是對骨肉瘤進行差異基因篩選,力圖找出其特異性或相對特異性差異表達基因,為骨肉瘤發(fā)病機理的研究提供基因水平的理論依據(jù),并為其臨床預防、早期診斷及基因治療提供新思路.研究對象為5對同源性骨肉瘤組織和正常骨組織標本,每對均取自同一骨肉瘤患者之截除肢體.提取標本的總RNA,其中的mRNA反轉錄合成cDNA第一鏈,再以3種錨定引物和8個隨機引物分別組合成的24對引物,利用經(jīng)反復改進的差異顯示PCR(DD-PCR)技術對cDNA進行擴
2、增,通過測序膠分離和同位素標記物的放射自顯影選取差異條帶,進行差異基因篩選(理論上應用24對引物可檢出98﹪以上的差異表達基因);回收的條帶克隆到T載體上,進行測序和計算機分析,并在GenBank檢索確認是否為新基因.該實驗采用多對同源性組織標本,挑選差異條帶的交集,這樣既可避免個體差異因素,又可較為完全地篩出差異基因,得到骨肉瘤普遍存在的特異性差異表達基因.總之,以骨肉瘤組織和正常骨組織作為研究對象,運用DDRT-PCR技術獲得骨肉瘤
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