軟骨素酶ABC促進自體神經移植后軸突再生.pdf

1、周圍神經損傷后增殖的雪旺細胞提供了一個有利于軸突再生的環(huán)境。它可作為軸突生長的細胞底物，并可以分泌眾多神經營養(yǎng)因子，表面表達細胞粘連分子和整合蛋白，產生層粘蛋白、纖連蛋白、膠原和蛋白聚糖等胞外基質分子。還分泌多種單核細胞趨化因子以刺激巨噬細胞向變性神經的募集，后者可清除軸突和髓鞘碎片，并清除抑制軸突生長的髓鞘相關糖蛋白(MAG)。由多種胞外基質成分構成的基底膜是周圍神經再生所必需的生長底物。神經損傷后，損傷以遠的基底膜的完整性能得以保留

2、是神經再生的必要條件。在眾多胞外基質分子中既有促進軸突生長的分子，如層粘蛋白、纖連蛋白和Ⅳ型膠原等，也有抑制軸突生長的分子，如硫酸軟骨素蛋白聚糖(CSPGs)。后者同樣存在于中樞神經系統(tǒng)中，并是抑制中樞神經損傷后再生的重要因素。周圍神經損傷后胞外基質的重塑，即增加促軸突生長的分子，去除抑制分子，對于神經再生是十分重要的。軟骨素酶ABC是針對葡糖胺聚糖(GAG)的特異性糖苷酶，可以分解CSPGs上的GAG側鏈，從而降解CSPGs。利用軟骨

3、素酶ABC降解CSPGs來促進神經再生，改善功能恢復已經在眾多中樞神經損傷的研究中得到證實，但有關其對周圍神經再生的作用的研究還很少。此外軟骨素酶ABC治療對雪旺細胞的影響，以及對基底膜的其他成分和基底膜結構完整性的影響均不明了。 本研究以大鼠為研究對象，建立自體坐骨神經移植模型，用軟骨素酶ABC對移植的神經進行移植前預處理。通過電生理檢查和組織學觀察研究移植后神經再生的情況，并利用免疫組化技術觀察軟骨素酶ABC治療對移植神經內

4、雪旺細胞和基底膜層粘蛋白這兩種主要的促再生因素的影響。 方法： 1．軟骨素酶ABC治療對移植神經再生的影響30只大鼠隨機分為3組，每組10只。A組為空白對照組，B組為賦形劑組，C組為實驗組(軟骨素酶治療組)。 鹽酸氯胺酮注射液腹腔注射麻醉。兩側臀部斜行切口。劈開臀肌，分離股二頭肌和半膜半腱肌，暴露并游離各組雙側坐骨神經。在距離梨狀肌下緣約8mm處向遠端切除右側坐骨神經5mm，兩斷端回縮后形成約10mm的間隙以接納

5、移植神經；切除左側坐骨神經10 mm作為移植神經。A組：切取左側坐骨神經10mm直接移植于右側缺損處。B組：切取左側坐骨神經10 mm，在100μl PBS(賦形劑)溶液中浸泡2 h 后移植于右側缺損處。C組：切取左側坐骨神經10mm，在100μl軟骨素酶 ABC 溶液中(10U/ml)浸泡2 h后移植于右側缺損處。術后8周進行運動神經傳導速度測定。電生理檢查完畢后切取各組移植神經中段5 mm的神經節(jié)段。每組各隨機選取1個神經節(jié)段做透射

6、電鏡觀察，其余神經節(jié)段制成橫切片，做神經纖維Palmgren鍍銀染色，光學顯微鏡觀察再生軸突的密度。 2．軟骨素酶ABC治療對移植神經層粘蛋白/基底膜的影響16只大鼠隨機分為2組，每組8只。A組為對照組，B組為實驗組。 手術方法同上。A組：切取左側坐骨神經10 mm直接移植于右側缺損處。B組：切取左側坐骨神經10mm，在100μl軟骨素酶ABE溶液中浸泡2h后移植于右側缺損處。 術后5天取材。切取各組移植神經近段

7、5mm的神經節(jié)段制成橫切片，用多克隆抗層粘蛋白抗體標記層粘蛋白，觀察層粘蛋白免疫反應陽性產物在移植神經內的分布概況。 3．軟骨素酶ABC治療對移植神經雪旺細胞的影響16只大鼠隨機分為2組，每組8只。A組為對照組，B組為實驗組。 手術方法同上。A組：切取左側坐骨神經10 mm直接移植于右側缺損處。B組：切取左側坐骨神經10 mm，在100μl軟骨素酶ABC溶液中浸泡2 h后移植于右側缺損處。 術后14天取材。切取各

8、組移植神經近段5 mm的神經節(jié)段制成橫切片，用多克隆抗S-100蛋白抗體標記雪旺細胞，觀察移植神經內S-100免疫反應陽性細胞的密度。 結果： 1．軟骨素酶ABC治療對移植神經再生的影響術后8周時A、B、C三組移植神經的運動傳導速度的差異沒有統(tǒng)計學意義(P=0.381)，空白對照組與賦形劑組之間再生軸突數(shù)目的差異沒有統(tǒng)計學意義(P=0.607)，實驗組再生軸突的數(shù)目多于空白對照組和賦形劑組(P<0.05)。 2．

9、軟骨素酶ABC治療對移植神經層粘蛋白/基底膜的影響術后5天時對照組與實驗組的基底膜均呈現(xiàn)層粘蛋白陽性反應，且兩組基底膜結構的完整性相似。 3．軟骨素酶ABC治療對移植神經雪旺細胞的影響術后14天時兩組大鼠移植神經均見S-100陽性染色細胞，分布較為均勻。對照組與實驗組S-100陽性染色細胞的密度的差異沒有統(tǒng)計學意義 (P=0.945)。 上述結果提示： 1．軟骨素酶ABC對移植神經做移植前預處理，可以促進近端神經