人CD14基因重組、真核表達(dá)及其在牙髓、牙齦炎中作用的實驗研究.pdf

1、第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文人CD14基因重組、真核表達(dá)及其在牙髓、牙齦炎中作用的實驗研究姓名：王勝朝申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：口腔醫(yī)學(xué)(口內(nèi))指導(dǎo)教師：史俊南;蔭俊2000.6.1中文摘要 第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文人C D l 4 基因重組、真核表達(dá)及其在牙髓、牙齦炎中作用的實驗研究博士研究生 王勝朝導(dǎo) 師 史俊南副導(dǎo)師 蔭俊吳補領(lǐng)摘 要C D l 4 是內(nèi)毒素( L P S ) 的特異性受體。k h p S 刺激機體產(chǎn)生免疫防御反應(yīng)首先需

2、要與C D l 4 結(jié)合，然后將信號傳入細(xì)胞內(nèi)，啟動炎癥應(yīng)答。牙髓炎、尖周炎、牙周炎等疾病均是革蘭氏陰性厭氧菌為主的混合感染，而革蘭氏陰性厭氧菌的主要毒力因子就是L P S ，因此推測C D l 4 在牙鑿炎性病變過程中起重要作用。』C D l 4 在機體中以兩種形式存在：一種位于髓細(xì)胞膜，稱為膜結(jié)合C D l 4 ( m C D l 4 ) ；另～種游離于血漿，稱為可溶性C D l 4( s C D l 4 ) 。s C D l 4

3、功能尚不十分清楚，據(jù)報道高濃度的s C D l 4 可以抑制L P S 誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，基因重組s C D l 4 可能有治療價值。基于s C D l 4 功能研究需要和潛在的應(yīng)用價值，用基因工程方法表達(dá)s C D l 4 很有意義。本文從C D l 4 的基因入手主要進(jìn)行了以下實驗：一、 C D l 4 基因重組及序列分析，f 以m C D l 4 基因為模板，采用P C R 方法將c D l 4 基因進(jìn)行了重組：一方面對C D l

4、4 基因起始密碼上游作了真核表達(dá)優(yōu)化突變，引入K o z a k 序列；另一方面，根據(jù)文獻(xiàn)報道分別在C D l 4 成熟肽3 4 8 位和1 5 2 位截短了C D l 4基因的3 ’端序列，以期得到在體外可溶性形式表達(dá)的C D l 4 基因。P C R擴增的兩個基因片段大小分別為1 ．1 k b 和O ．5 k b ，與預(yù)期一致，連入T 載體測序結(jié)果表明突變序列符合預(yù)期要求，保留序列與報道的C D l 4 基因一致。這兩個基因片段分別