海馬HCN通道在慢性內(nèi)臟痛大鼠中樞敏化中的作用.pdf

1、目的：觀察海馬超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道（HCN通道）對慢性內(nèi)臟痛大鼠痛覺敏感性的影響并探討其作用機制，以期深入了解慢性功能性內(nèi)臟痛的發(fā)病機制，從而為慢性內(nèi)臟痛的藥物治療提供新的作用靶點。
　　方法：選用新生SD大鼠，出生后8～14d內(nèi)，每天固定時間給予一次60mmHg壓力的結(jié)直腸刺激（CI）建立慢性功能性內(nèi)臟痛模型，對照大鼠除了不行CI外，其他情況均同模型大鼠。①測量大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張的放電反應(yīng)以評估其腸道痛覺的敏感

2、性；Westernblot方法觀察比較 HCN1及HCN2通道蛋白在對照與模型大鼠海馬的表達情況。②海馬內(nèi)微量注射不同濃度的 ZD7288（選擇性 HCN通道阻斷劑），觀察其對模型大鼠內(nèi)臟痛敏反應(yīng)的影響；同時采用免疫組織化學(xué)法檢測對照及模型大鼠海馬CA1區(qū)HCN1及HCN2通道蛋白的表達及分布情況；并觀察海馬內(nèi)連續(xù)三天給予高劑量的ZD7288后是否影響其表達。③采用離體腦片場電位的記錄方法，觀察慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP；并觀察不同

3、濃度的 ZD7288或尼氟酸（NFA）對慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP的影響。
　　結(jié)果：
　　1.慢性內(nèi)臟痛模型大鼠的特點
　?、倌Ｐ痛笫髢?nèi)臟痛敏反應(yīng)顯著高于對照大鼠。② Wester n b lo t結(jié)果顯示，與正常大鼠比較，HCN1及HCN2通道蛋白在慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬的表達均顯著增加。
　　2. ZD7288對慢性內(nèi)臟痛大鼠痛覺敏感性的影響
　　海馬內(nèi)注射ZD7288可劑量依賴性顯著降低慢性內(nèi)臟痛大

4、鼠內(nèi)臟痛敏反應(yīng)。
　　3.慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP的變化
　　與正常大鼠相比較，慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP的峰值及斜率均顯著增加。
　　4. ZD7288對慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP的影響
　　與正常大鼠相比較，慢性內(nèi)臟痛大鼠離體海馬腦片灌流液中加入 ZD7288可劑量依賴性顯著降低海馬場電位 LTP的峰值及斜率。
　　5.尼氟酸對慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬場電位LTP的影響
　　與正常大鼠相比

5、較，慢性內(nèi)臟痛大鼠離體海馬腦片灌流液中加入尼氟酸可劑量依賴性顯著降低海馬場電位 LTP的峰值及斜率。
　　6. HCN通道與慢性內(nèi)臟痛大鼠痛覺敏感性關(guān)系的形態(tài)學(xué)研究
　　觀察 HC N通道蛋白在海馬CA1區(qū)的表達，對照與模型大鼠均可見陽性細(xì)胞，其中主要在胞膜和胞漿上表達。圖像分析結(jié)果表明，模型大鼠HCN1與HCN2通道蛋白在上述部位的表達較對照大鼠顯著增強；且慢性內(nèi)臟痛大鼠海馬內(nèi)給予高劑量ZD7288后HCN2通道蛋白表達明