TNF-α-ERK途徑在PNS預(yù)處理緩解SD大鼠炎性內(nèi)臟痛中的作用.pdf

1、[目的]檢測(cè) PNS預(yù)處理 SD大鼠炎性內(nèi)臟痛中 TNF-a與ERK1/2蛋白的表達(dá)變化，初步探討PNS預(yù)處理緩解炎性內(nèi)臟痛的機(jī)制。
　　[方法]用行為學(xué)方法及VPI評(píng)分檢測(cè)乙酸致炎性內(nèi)臟痛SD大鼠模型；組織學(xué)方法通過HE染色，免疫組化、WB及ELISA等方法檢測(cè)脊髓背角 TNF-a、IL-1β的表達(dá)以及 ERK1/2的磷酸化改變；通過PNS預(yù)處理干預(yù)后，比較炎性內(nèi)臟痛的變化脊髓背角 TNF-a、IL-1β的表達(dá)以及ERK1/2的

2、磷酸化改變等。
　　[結(jié)果]1. VPI評(píng)分結(jié)果：腹腔注射乙酸后，NS預(yù)處理組大鼠在第1個(gè)15min VPI均數(shù)為79分，在第15-30min達(dá)到反應(yīng)高峰，30min時(shí)VPI評(píng)分為124分，持續(xù)到第70min左右；PNS預(yù)處理組大鼠在第1個(gè)15min VPI均數(shù)為40分，在第20-35min達(dá)到反應(yīng)高峰，VPI評(píng)分為118分，持續(xù)到第60min左右。兩實(shí)驗(yàn)組相較，NS預(yù)處理組大鼠VPI評(píng)分較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。從

3、第120min開始，兩實(shí)驗(yàn)組大鼠的VPI評(píng)分無明顯差異。2. HE染色結(jié)果：正常大鼠小腸平滑肌厚度50μm左右，注射乙酸后，大鼠小腸明顯抽搐，平滑肌厚度變化明顯，60min時(shí)最薄，為15±3.70μm。計(jì)數(shù)中性粒細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)注射乙酸后其數(shù)目迅速增高，60min達(dá)峰值。PNS預(yù)處理組各亞組粒細(xì)胞計(jì)數(shù)與NS預(yù)處理組相比，無明顯差異；3．TNF-α、IL-1β的表達(dá)變化：注射1％乙酸后，TNF-a的表達(dá)迅速增加，30min時(shí)即達(dá)到1200pg/

4、ml，90min時(shí)達(dá)到峰值（1450±35pg/ml）。180min時(shí)仍有1000pg/ml以上。正常大鼠脊髓中幾乎沒有檢測(cè)到IL-1β的表達(dá)，注射1%乙酸后，IL-1β的表達(dá)迅速增加，60min時(shí)達(dá)到峰值（15±1.32pg/ml）。180min時(shí)仍有1000pg/ml以上。與NS預(yù)處理組相比較，注射1%乙酸后，TNF-a的表達(dá)增幅減小，30min時(shí)為500pg/ml，90min時(shí)達(dá)到峰值（750±23pg/ml）。TNF-a的濃度各

5、時(shí)間點(diǎn)均小于NS預(yù)處理組。PNS預(yù)處理后用ELISA法檢測(cè)炎性內(nèi)臟痛大鼠脊髓IL-1β的濃度變化。與NS與處理組相比較，注射1%乙酸后，IL-1β的表達(dá)增幅減小不明顯，這與TNF-a表達(dá)不同。4．胸段脊髓背角 p-ERK1/2的表達(dá)：在脊髓前角和中央側(cè)角，p-ERK1/2可見表達(dá)在胞體，在背角，清晰的神經(jīng)元胞體不可見。腹腔注射乙酸后，NS預(yù)處理各亞組脊髓背角p-ERK1/2表達(dá)均高于正常組，30、60min組p-ERK1/2表達(dá)逐漸增高

6、，90，180min亞組p-ERK1/2表達(dá)有所下調(diào)，60min組p-ERK1/2表達(dá)最高; PNS預(yù)處理組30min亞組 p-ERK1/2的表達(dá)略強(qiáng)于正常，但差異不顯著，60、90、120min各亞組p-ERK1/2表達(dá)逐漸增加，120min時(shí)最高，180min時(shí)下調(diào)。且60、90min亞組p-ERK1/2表達(dá)明顯低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)NS預(yù)處理組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　[結(jié)論]PNS預(yù)處理緩解SD大鼠炎性內(nèi)臟痛的機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)TN