PKMζ在腸易激綜合征模型大鼠慢性內(nèi)臟痛脊髓中樞敏化中的作用.pdf

1、目的：研究蛋白激酶Mζ（Protein kinase Mζ,PKMζ）在腸易激綜合征（Irritable Bowel Syndrome,IBS）模型大鼠慢性內(nèi)臟痛脊髓中樞敏化中的作用，闡明IBS慢性內(nèi)臟痛的發(fā)病機制，為IBS慢性內(nèi)臟痛治療藥物的開發(fā)提供新的作用靶點與思路。
　　方法：①新生雄性SD大鼠出生后第3～21天，每天固定時間母嬰分離3小時，建立IBS慢性內(nèi)臟痛研究模型。②大鼠8周后測量結直腸擴張引起的腹外斜肌放電幅值，評估

2、建模是否成功。③采用Western blot方法檢測IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓胸腰段和腰骶段PKMζ以及磷酸化PKMζ的表達水平。④觀察比較鞘內(nèi)注射不同劑量PKMζ特異性抑制劑ZIP（1μg、5μg和10μg）前后在不同結直腸擴張壓力（20～80mmHg）下腹外斜肌放電幅值的差異，明確PKMζ對IBS大鼠內(nèi)臟痛覺敏感性的影響。⑤采用曠場試驗方法檢測鞘內(nèi)注射10μgZIP對IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠和正常對照大鼠運動功能是否有影響。
　　結

3、果：1.IBS慢性內(nèi)臟痛模型大鼠內(nèi)臟痛覺敏感性顯著增強
　　在結直腸擴張壓下正常大鼠的腹外斜肌放電幅值（基礎幅值％）分別是12.35±2.77，203.17±26.68，321.45±21.77和393.84±28.47；IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠的腹外斜肌放電幅值（基礎幅值%）分別是115.25±33.72，528.15±67.13，815.10±60.29和900.41±94.41。IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠在不同結直腸擴張壓力力下的腹外

4、斜肌放電幅值均顯著高于正常大鼠（p<0.05）。與正常大鼠相比，IBS慢性內(nèi)臟痛模型大鼠5min內(nèi)的運動總路程和平均速度顯著減少（p<0.05）。
　　2.磷酸化PKMζ在IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓胸腰段的表達顯著增強
　　Western blot方法檢測顯示，與正常對照大鼠相比，PKMζ在IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓胸腰段的表達水平無明顯變化，而磷酸化PKMζ在IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓胸腰段的表達顯著增高（p<0.05）。

5、>　　3.磷酸化PKMζ在IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓腰骶段的表達顯著增強
　　通過Western blot方法顯示，與正常對照大鼠相比，PKMζ在IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓腰骶段的表達無明顯變化。磷酸化PKMζ在IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓腰骶段的表達顯著高于正常對照大鼠（p<0.05）。
　　4.PKMζ抑制劑ZIP可顯著降低IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠內(nèi)臟痛覺敏感性
　?、僬φ沾笫笄蕛?nèi)注射不同劑量PKMζ抑制劑ZIP或溶媒前后

6、在不同結直腸擴張壓力（20～80mmHg）下腹外斜肌放電幅值差異均無統(tǒng)計學意義；②IBS慢性內(nèi)臟痛模型大鼠鞘內(nèi)注射1μgZIP或溶媒前后在不同結直腸擴張壓力（20～80mmHg）下腹外斜肌放電幅值差異均無統(tǒng)計學意義；③IBS模型大鼠鞘內(nèi)分別注射5μg和10μgZIP前后，在不同結直腸擴張壓力（20～80mmHg）下腹外斜肌放電幅值差異均有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；④鞘內(nèi)注射10μgZIP對IBS大鼠內(nèi)臟痛覺敏感性的抑制作用最少可持續(xù)至

7、給藥后150min，且最佳作用時間約為給藥后30～90min。
　　5.鞘內(nèi)注射ZIP對IBS慢性內(nèi)臟痛大鼠的運動行為無明顯影響
　　正常對照大鼠鞘內(nèi)注射10μgZIP與鞘內(nèi)注射溶媒相比，5min內(nèi)的運動總路程和平均速度均無明顯統(tǒng)計學意義（p>0.05）；IBS慢性內(nèi)臟痛模型大鼠鞘內(nèi)注射10μgZIP與鞘內(nèi)注射溶媒相比，5min內(nèi)的運動總路程和平均速度也無明顯差別（p>0.05）。
　　結論：PKMζ可能通過磷酸化活化