小鼠自發(fā)性乳腺癌發(fā)生相關(guān)的血清差異蛋白初步研究.pdf

1、目的：運用蛋白質(zhì)組學(xué)雙向電泳技術(shù)，研究自發(fā)乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清蛋白質(zhì)組表達圖譜的差異，結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)和生物信息學(xué)方法尋找和確定小鼠自發(fā)性乳腺癌發(fā)生相關(guān)的特征性血清差異蛋白，為乳腺癌發(fā)生及早期診斷的蛋白質(zhì)指紋圖譜的建立奠定基礎(chǔ)。 方法：1在自發(fā)乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠內(nèi)眥取血，5000rps/min，離心10min后收集血清，將血清標(biāo)本進行雙向電泳，以固相pH梯度(IPG)等電聚焦(IEF

2、)為第一向和垂直十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)為第二向，雙向電泳結(jié)果經(jīng)銀染和ImageMaster2D5.0軟件分析進行數(shù)字化匹配與對比，并通過統(tǒng)計學(xué)分析方法評價雙向凝膠電泳結(jié)果，確認(rèn)差異蛋白點。 2經(jīng)雙向電泳確認(rèn)為有差異的蛋白點，重新進行雙向電泳后進行考馬斯亮藍染色，通過電噴霧-離子肼串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-TOF)進行鑒定，獲得的肽圖和氨基酸序列經(jīng)過SEQUEST數(shù)據(jù)庫檢索分析后，識別鑒定各個蛋白質(zhì)。通過搜

3、索IPImouse蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，對鑒定出的各個蛋白質(zhì)進行功能分析，闡述其在乳腺癌發(fā)生過程中作用的相關(guān)機制。 結(jié)果：1雙向電泳預(yù)實驗結(jié)果表明，自發(fā)乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清的雙向電泳圖譜清晰、重復(fù)性較好，銀染后經(jīng)ImageMaster2D5.0軟件分析，不同膠匹配點相對含量的比值大于10者認(rèn)為存在差異，共找到15個蛋白質(zhì)點。其中6個點在自發(fā)乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠表達缺失，在正常TA1小鼠表達；4個點在自發(fā)乳

4、腺癌小鼠表達下調(diào)，在正常TA1小鼠表達上調(diào)，在正常TA2小鼠表達缺失；1個點在自發(fā)乳腺癌小鼠表達下調(diào)，在正常TA2表達上調(diào)，在正常TA1表達缺失；2個點在自發(fā)乳腺癌小鼠表達缺失，在正常TA2小鼠表達下調(diào)，在正常TA1小鼠表達上調(diào)；2個點在自發(fā)乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠表達下調(diào)，在正常TA1小鼠表達上調(diào)。 2重新對樣本進行雙向電泳后進行考馬斯亮藍染色，共得到11個蛋白點，對這11個蛋白點進行電噴霧-離子肼串聯(lián)質(zhì)譜檢測，共得到9張肽

5、質(zhì)量指紋圖譜(PMF)，經(jīng)IPImouse數(shù)據(jù)庫中檢索確定了四種蛋白質(zhì)，分別為免疫球蛋白重鏈、血清白蛋白前體、clusterin前體和ApolipoproteinA-I前體，這四種蛋白在自發(fā)乳腺癌小鼠和正常TA2小鼠中表達下調(diào)或缺失，而在正常TA1小鼠中表達上調(diào)或表達。 結(jié)論：1根據(jù)蛋白質(zhì)不同的分子量和等電點，通過固相pH梯度雙向凝膠電泳可將自發(fā)乳腺癌小鼠、正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清中蛋白質(zhì)成份進行分離，并利用分析軟件分

6、析表明自發(fā)乳腺癌小鼠及正常TA2小鼠和正常TA1小鼠血清中存在差異蛋白質(zhì)。 2電噴霧-離子肼串聯(lián)質(zhì)譜分析鑒定的差異蛋白為人類乳腺癌血清學(xué)診斷指標(biāo)提供了參考依據(jù)。免疫球蛋白重鏈和clusterin前體與小鼠自發(fā)性乳腺癌的發(fā)生可能存在一定的關(guān)系。免疫球蛋白重鏈在自發(fā)乳腺癌小鼠中表達缺失，可能是因為自發(fā)瘤小鼠存在免疫缺陷而容易受細(xì)菌、病毒感染而引發(fā)的腫瘤；clusterin前體可能與小鼠免疫活性調(diào)節(jié)有關(guān)，在自發(fā)乳腺癌小鼠中表達缺失，使