CTGF ASODN抗兔青光眼術(shù)后濾過泡疤痕形成的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗以青光眼濾術(shù)過后兔為模型，通過脂質(zhì)體介導結(jié)締組織生長因子反義核苷酸 (connective tissue growth factor antisenseoligonucleotide，CTGF ASODN)干擾體外培養(yǎng)兔眼結(jié)膜成纖維細胞增生，觀察結(jié)締組織生長因子反義寡核苷酸對濾過手術(shù)后濾過泡瘢痕形成的影響；研究結(jié)締組織生長因子在抗青光眼手術(shù)后濾過泡疤痕形成中的作用；為抗濾過泡區(qū)瘢痕提出了新的解決思路。 方法：取兔眼小

2、梁切除術(shù)后第5d之手術(shù)區(qū)結(jié)膜及板層鞏膜行成纖維細胞原代培養(yǎng)。利用脂質(zhì)體介導，將經(jīng)異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC)標記的結(jié)締組織生長因子反義核苷酸轉(zhuǎn)染至兔抗青光眼(glaucoma filtering surgery，GFS)后濾過泡疤痕組織成纖維細胞中，利用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(reverse transcription polymerasechain reaction，RT-PCR

3、)和檢驗結(jié)締組織生長因子mRNA的表達，用蛋白免疫印跡法(Western-Blot法)檢驗蛋白合成量。以相對灰度值為指標，觀察CTGFASODN對CTGF表達的抑制效果。 結(jié)果： (1)轉(zhuǎn)染結(jié)締組織生長因子反義寡核苷酸6h后可見研究組(A組)細胞胞漿中黃綠色熒光。12h后，研究組細胞胞漿內(nèi)可見大量熒光，對照組僅見少量熒光或無此現(xiàn)象； (2)研究組CTGF在mRNA水平的相對灰度值(mRNAindex，RI)明顯低