SELDI-TOF-MS技術(shù)對肝癌裸鼠移植瘤模型體內(nèi)微量蛋白譜分析.pdf

1、 目的：采用Bel-7402人肝癌細胞懸液接種于3周齡BALB/C裸鼠的左肩背部皮下,構(gòu)建人肝癌裸鼠移植瘤模型,觀察腫瘤大小與生長時間的相關(guān)性,利用SELDI-TOF-MS技術(shù)對造模成功后不同時段的裸鼠體內(nèi)差異蛋白的表達進行檢測,分析這些微量蛋白的表達規(guī)律,旨在尋找新的原發(fā)性肝癌早期診斷標志物。方法：將Bel-7402人肝癌細胞復(fù)蘇,傳代培養(yǎng)3-5次后選擇對數(shù)生長期細胞配置成濃度為1×107個/ml的癌細胞懸液,皮下接種于3組實驗組裸

2、鼠左肩背部,劑量為0.1ml/只,對照組裸鼠左肩背部皮下接種相同劑量無血清培養(yǎng)基。密切觀察實驗動物的腫瘤生長情況,每兩周測量并記錄裸鼠腫塊的體積。所有裸鼠均采用摘眼球取血法,對照組和3 組實驗組分別在造模成功后 20d、40d、60d 取血 0.5ml/只,然后處死裸鼠,并分離腫瘤組織送病理科進行組織切片檢查。裸鼠血液標本應(yīng)立即于4℃離心5 min,轉(zhuǎn)速為3000 rpm,分離樣本血清并分裝編號,凍存于-80℃?zhèn)溆?。?yīng)用 SELDI-T

3、OF-MS 技術(shù)檢測分析裸鼠血清標本中的微量蛋白,利用 Ciphergen ProteinChip 3.0 和 Ciphergen Biomaker Wizard 3.1 軟件對得到的蛋白質(zhì)譜圖進行數(shù)據(jù)采集和分析,篩選出與肝癌相關(guān)的差異表達蛋白,并在蛋白數(shù)據(jù)庫中進行檢索比對。結(jié)果：裸鼠接種癌細胞懸液 15-20天長出腫塊,成瘤率 100%。分析篩選出與肝癌相關(guān)并呈規(guī)律性變化的差異表達蛋白(P<0.01)5個,相對分子質(zhì)量分別為2016D

4、a、3309Da、3442Da、3745Da、2747Da,其中前四種微量蛋白在實驗組裸鼠體內(nèi)表達逐漸增強,最后一種微量蛋白在實驗組裸鼠體內(nèi)表達逐漸減弱。在 Swiss-Prot 蛋白數(shù)據(jù)庫中對這 5 組微量蛋白進行檢索和鑒定,初步結(jié)果為 Protein 2A、Potassium channel toxin alpha-KTx 20.1、Serine protease inhibitor 2、Neurotoxin P2和LeuA lea