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文檔簡介
1、研究背景:
哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病,近年來其患病率在全球范圍內(nèi)有逐年增加的趨勢(shì)。哮喘的發(fā)病機(jī)制到目前仍然不清楚。變態(tài)反應(yīng)、氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性、神經(jīng)因素等及其相互作用被認(rèn)為與哮喘的發(fā)病關(guān)系密切。臨床上對(duì)哮喘以內(nèi)科保守治療為主,但單一的藥物治療手段不能完全控制哮喘的發(fā)作或徹底的治愈。為此,一直有學(xué)者尋求外科治療手段嘗試治愈哮喘。大量研究證明過敏性哮喘的發(fā)病與支配氣道的植物神經(jīng)功能失衡密切相關(guān),特
2、別與迷走神經(jīng)功能亢進(jìn)相關(guān),臨床上也觀察到切斷肺門迷走神經(jīng)可使哮喘病人的癥狀得到明顯緩解。但其治療機(jī)制尚未明了,仍無令人信服的理論基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)研究。為此,我們開始了雙側(cè)肺門高選擇性迷走神經(jīng)切斷術(shù)(Highly SelectiveVagotomy of Hilus Pulmonis)治療過敏性哮喘的系列研究。在前期研究中,我們成功建立了過敏性哮喘的動(dòng)物模型,并在模型上實(shí)施雙側(cè)肺門迷走神經(jīng)切斷術(shù),證實(shí)了該手術(shù)治療方法的可行性、安全性及有效性。本
3、實(shí)驗(yàn)通過建立卵清蛋白(OVA)致敏大鼠的過敏性哮喘模型,檢測(cè)大鼠肺組織、血漿內(nèi)感覺神經(jīng)肽的含量,了解迷走神經(jīng)切斷后對(duì)過敏性哮喘大鼠肺組織、血漿內(nèi)感覺神經(jīng)肽的含量變化的影響;通過檢測(cè)大鼠顱內(nèi)延髓內(nèi)臟帶及下丘腦室旁核和視上核Fos蛋白的表達(dá),了解迷走神經(jīng)切斷后對(duì)感覺神經(jīng)肽介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥信息向中樞傳導(dǎo)通路的影響,從而探討雙側(cè)迷走神經(jīng)切斷治療神過敏性哮喘有效性的神經(jīng)源性炎癥機(jī)制,為臨床外科手術(shù)治療提供理論依據(jù)。
目的:
4、 1探討迷走神經(jīng)切斷治療大鼠過敏性哮喘肺內(nèi)和血漿內(nèi)感覺神經(jīng)肽的變化
2探討迷走神經(jīng)切斷后對(duì)神經(jīng)肽介導(dǎo)的神經(jīng)源性炎癥信息向中樞傳導(dǎo)的影響
3探討迷走神經(jīng)切斷治療大鼠過敏性哮喘有效性的神經(jīng)源性炎癥機(jī)制
方法:
1、哮喘動(dòng)物模型的制作及標(biāo)本的留取體重300±28g SPF級(jí) SD雄性健康大鼠40只,隨機(jī)分成4組,每組10只:A組(致敏哮喘后切斷迷走神經(jīng)組),B組(致敏哮喘組),C組
5、(空白對(duì)照組),D組(單純切斷迷走神經(jīng)組)。A、B組各10只,采用卵清蛋白(OVA)腹腔連續(xù)注射3天后,1周后采用卵蛋白(OVA)霧化吸入,隔天1次,持續(xù)霧化吸入1周,誘發(fā)哮喘發(fā)作。然后從雙側(cè)頸部切斷迷走神經(jīng),繼續(xù)霧化吸入OVA,1周后處死動(dòng)物取標(biāo)本;B組同A組一樣誘發(fā)哮喘后,行迷走神經(jīng)假切斷術(shù),然后繼續(xù)霧化吸入OVA,1周后處死動(dòng)物取標(biāo)本;C、D組第1至第3天用等量生理鹽水腹腔注射,1周后霧化吸入生理鹽水,隔天1次,持續(xù)霧化吸入1周。
6、C組在第14天行雙側(cè)迷走神經(jīng)假切斷,繼續(xù)霧化吸入生理鹽水1周后處死動(dòng)物取標(biāo)本。D組在第14天行雙側(cè)迷走神經(jīng)切斷術(shù),繼續(xù)霧化吸入生理鹽水1周后處死動(dòng)物取標(biāo)本。
取右肺中葉,進(jìn)行HE染色,行組織病理學(xué)檢查;取左肺上葉及血液通過酶聯(lián)免疫方法(ELISA)檢測(cè)大鼠肺組織、血漿中感覺神經(jīng)肽A(NKA)、感覺神經(jīng)肽B(NKB)、P物質(zhì)(SP)的含量。取得腦組織,選取延髓內(nèi)臟帶(MVZ)、下丘腦室旁核(PVN)和視上核(SON)對(duì)應(yīng)的典
7、型平面,用免疫組織化學(xué)ABC法檢測(cè)大鼠延髓內(nèi)臟帶(MVZ)、下丘腦室旁核(PVN)和視上核(SON)神經(jīng)元Fos蛋白的表達(dá)情況。
2、檢測(cè)指標(biāo)
2.1鏡下對(duì)4組肺組織HE切片進(jìn)行比較。
2.2肺組織、血漿內(nèi)的NKA、NKB、SP的含量。
2.3每只動(dòng)物各選取MVZ、PVN和SON對(duì)應(yīng)的典型平面,采用Image-Pro Plus6.0圖象分析軟件對(duì)Fos蛋白陽性表達(dá)區(qū)域進(jìn)行掃描并測(cè)出
8、每張切片8個(gè)隨機(jī)視野的IOD值,取其平均值。
3、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
本研究采用的評(píng)價(jià)指標(biāo)為連續(xù)型變量,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上采用4組隨機(jī)對(duì)照的方法,數(shù)據(jù)以統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0處理。4組之間各評(píng)價(jià)指標(biāo)都進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊者使用多組均數(shù)間方差分析,方差不齊者使用多組基于秩次的非參數(shù)檢驗(yàn)。凡涉及均數(shù)結(jié)果以X±S形式給出,當(dāng)P<0.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)流程圖
結(jié)果:
1、各組標(biāo)本鏡下
9、肺組織HE切片:哮喘組與哮喘后切斷迷走神經(jīng)組、空白組、單純迷走神經(jīng)切斷組相比,各級(jí)支氣管及周圍有大量中性粒胞浸潤,浸潤的嗜酸細(xì)胞主要存在于小血管周圍,嚴(yán)重者浸潤的嗜酸細(xì)胞呈小片狀分布,同時(shí)也伴有多量漿血管管腔輕度擴(kuò)張,周圍間質(zhì)水腫,可見小氣管收縮征像,管腔變窄。
2、肺組織內(nèi)NKA的含量在A、B、C、D組中分別為:3.21±1.21、7.32±2.36、3.45±1.37、2.92±0.83(單位:ng/克蛋白);NKB的
10、含量在A、B、C、D組中分別為89.45±40.87、158.26±76.66、90.31±45.65、79.19±39.45(單位:pg/克蛋白);SP的含量在A、B、C、D組中分別為89.44±30.32、123.67±51.31、82.78±38.33、79.22±42.26(單位:pg/克蛋白)。B組的NKA、NKB、SP含量分別與A、C、D組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),A、C、D三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
11、> 3、血漿中NKA的含量在A、B、C、D組中分別為:23.26±8.25、35.47±11.27、20.71±7.46、17.56±5.38(單位:ng/ml);NKB的含量在A、B、C、D組中分別為0.89±0.42、1.55±0.67、0.76±0.41、0.69±0.39(單位:ng/ml);SP的含量在A、B、C、D組中分別為8.23±5.34、15.23±7.22、7.87±3.55、8.65±4.67(單位:ng/m
12、l)。B組血漿內(nèi)的NKA、NKB、SP含量分別與A、C、D組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),A、C、D三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
4、在延髓內(nèi)臟帶(MVZ)中A、B、C、D四組Fos蛋白陽性表達(dá)的IOD值分別為80.02±20.34;129.01±45.45;95.43±23.3;88.35±30.23。B組(哮喘組)延髓內(nèi)臟帶(MVZ)中Fos蛋白陽性表達(dá)量高于其他三組(P<0.05)。在下丘腦室旁核(PVN
13、)中,A、B、C、D四組Fos蛋白陽性表達(dá)的IOD值分別為75.45±25.21;126.45±43.23;88.23±30.23;79±23.95。B組(哮喘組)下丘腦室旁核(PVN)中Fos蛋白陽性表達(dá)量高于其他三組(P<0.05)。在下丘腦視上核(SON)中,A、B、C、D四組Fos蛋白陽性表達(dá)的IOD值分別為83.28±32.21;119.30±41.77;70.23±23.56;87.23±38.67。B組(哮喘組)下丘腦視上
14、核(SON)中Fos蛋白陽性表達(dá)量高于其他三組(P<0.05)。
結(jié)論:
1.迷走神經(jīng)切斷后哮喘大鼠肺組織內(nèi)、血漿內(nèi)感覺神經(jīng)肽含量下降。
2.迷走神經(jīng)是肺部神經(jīng)源性炎癥信息向中樞MVZ、PVN、SON傳遞的通路之一。
3.迷走神經(jīng)切斷治療過敏性哮喘有效性的機(jī)制包括:
(1)阻斷軸突反射直接減少了感覺神經(jīng)肽的釋放
(2)減弱了感覺神經(jīng)肽增強(qiáng)炎癥反應(yīng)及增加炎
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