田基黃抗腫瘤活性成分與含量測定方法研究.pdf

1、田基黃Hypericum japonicum Thunb.,系藤黃科(Guttiferae)金絲桃屬(Hypericum L.)植物,為一年生小草本,廣泛分布于我國長江流域及其以南各地。
　　 田基黃提取物被制成注射液和糖漿用于治療肝炎、原發(fā)性肝癌等。有文獻報道田基黃及其注射液對多種腫瘤細胞有抑制作用,而對正常細胞無毒副作用,然而什么是田基黃抗腫瘤作用的活性成分尚無報道。因此,本研究以MTT法為藥理指標,采用體外抗腫瘤活性跟蹤與

2、化學分離相結合的方法,確定了田基黃的抗腫瘤活性成分,并以其為指標對田基黃藥材進行質(zhì)量控制。
　　 采用80％乙醇對田基黃藥材進行提取,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到不同部位萃取物,抗腫瘤活性測定顯示:氯仿萃取層對Bel-7402和Hela,細胞株有一定的抑制作用,IC50值分別為151.4μg·mL-1和174.9μg·mL-1。因此確定田基黃乙醇提取物的氯仿萃取層為抗腫瘤活性部位。
　　 取田基黃干燥全

3、草5kg粉碎,過20目篩,用80％乙醇回流提取,氯仿萃取得到活性部位后,進行反復硅膠柱層析、聚酰胺柱層析、Sephadex LH-20柱層析和制備液相等多種手段對其化學成分進行分離、純化。從該活性部位中分離得到7個化合物,經(jīng)理化性質(zhì)和光譜分析分別鑒定為:槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷、異槲皮苷、小麥黃素、異巴西紅厚殼素、槲皮素、金絲桃苷和槲皮苷。其中小麥黃素為首次從田基黃中分離得到。
　　 采用MTT法對以上7個化合物進行抗腫

4、瘤活性分析,結果表明:小麥黃素和異巴西紅厚殼素對Bel-7402,Hela,Colo,A549,SGC-7901和Heps等6種體外培養(yǎng)的腫瘤細胞具有明顯的抑制作用。小麥黃素對以上6種腫瘤細胞的IC50為7.61～20.4μg·mL-1。異巴西紅厚殼素對以上6種腫瘤細胞的IC50為3.86～8.52μg·mL-1。由此可以推測小麥黃素和異巴西紅厚殼素為田基黃抗腫瘤作用的重要活性成分。
　　 建立了測定田基黃中抗腫瘤活性物質(zhì)異巴西

5、紅厚殼素含量的反相高效液相色譜法,采用Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,流動相為乙腈-0.04％磷酸水(47:53,v/v),流速為1.0 mL·min-1,檢測波長為254 nm,柱溫為30℃。異巴西紅厚殼素線性范圍1.68～56 mg·L-1,r=0.9997(n=6)；平均回收率為101.5％(RSD=2.5％,n=9)。該方法簡便、快速、精密度好,可為田基黃的質(zhì)量控制提供指標。
　　 建

6、立了田基黃中異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素-7-O—α-L-鼠李糖苷和槲皮素等4種黃酮同時含量測定的反相高效液相色譜法,采用Zorbax SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.5％(v/v)HAc水溶液為流動相進行梯度洗脫,流速為1.0 mL·min-1,檢測波長為360 nm,柱溫為35℃。異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素-7-O-α-L-鼠李糖苷和槲皮素濃度分別在6.09～203 mg·L-1、18.93～631