從樹突狀細胞Toll信號傳導通路探討肝癌發(fā)生的分子機制.pdf

1、從樹突狀細胞Toll信號傳導通路探討肝癌發(fā)生的分子機制博士研究生導師董薇蔡美英教授本課題受高等學校博士學科點專項科研基金(0040105102006)資助二OO四年十二月●●●董薇博士學位論文：從樹突狀細胞Tol1信號傳導通路探討肝癌發(fā)生的分子機制2[結(jié)果]采用GM—CSFIL一4誘導外周血單核細胞的方法，可平均從lOOml健康人外周血中獲得96X106個成熟DC。誘導出的90％以上Dc表達DC特異性標志CDla，而單核細胞標志CDl4

2、仍未消失，達322％，CD86(712％)，CD40(726％)，CD83(728％)，HLA—DR(693％)，HLAABC(679％)，CD54(660％)，C080(762％)是未成熟DC(imDC)。經(jīng)LPS誘導24h后，除CDl4外，Dc的表面標志表達增高，CD83(935％)，CD86(964％)，CD40(889％)，HLA—DR(929％)，CD54(975％)，HLA—ABC(99O％)，CD80(876％)是成熟Dc

3、(mDC)。隨著培養(yǎng)時間的延長，DC的成熟程度不同，內(nèi)吞能力也隨之改變，培養(yǎng)的第3天達高峰，以后明顯下降。加入LPS誘導24h后，內(nèi)吞能力有所下降。少量DC即可強烈激發(fā)T淋巴細胞的增殖，并隨著Dc濃度增加而刺激作用逐漸增強，加入LPS誘導24h后，Dc的刺激能力略有增強。DC在不同的培養(yǎng)時期分泌的IL一12水平不一，在第7天時水平最高。LPS刺激后IL—12水平略有增高。正常DC培養(yǎng)上清中基本沒有TNF—d的表達，LPS刺激后有TNF—

4、d的分泌。LPS誘導后MLR中IFNY分泌增加。imOC中有TLR2、TLR3、TLR4的表達，其中以TLR3表達最強。LPS刺激24h后，mDC中TLR2、3、4表達顯著下降。imDC中熒光主要聚集在胞漿部位，胞核為陰性，mDC的細胞核染色陽性。HCC患者外周血來源的DC，在形態(tài)上和正常DC無差別，有明顯的根須狀突起，其表面分子標志HLA—DR明顯低于正常，即使LPS刺激后表達也較低，HCCDC的CDl4表達非常低，幾乎檢測不到。其余

5、標志都低于正常DC，LPS刺激后稍有升高。但是HCCDC的吞噬能力卻高于正常DC。分泌的IL一12、TNF—a、IFN—Y均比正常值低，刺激T細胞增殖的能力也弱于正常OC，LPS刺激后各細胞因子的分泌、刺激能力有所增加，但仍低于正常值。在HCCDC的TLRs信號途徑中，TLR2、3、4mRNA水平明顯低于正常值。LPS誘導后TLR2、3、4mRNA水平進一步降低。HCCDC的熒光主要位于胞漿部位，但熒光強度弱于正常imOC，LPS刺激后

6、，熒光移位至核內(nèi)，胞漿及胞核均為弱陽性。[結(jié)論]聯(lián)合應用GM—CSFIL4可以將健康人外周血單核細胞誘導為DC，但經(jīng)功能學分析，該DC是imDC，LPS刺激24h后，DC進一步分化成熟。LPS是DC的一種促成熟因子。imDC上CDl4表達并未消失，其TLR2、3、4mRNA水平比較高，LPS刺激后C014表達下降，TLR2、3、4基因水平也顯著下降。說明CDl4及YhRs參與LPS信號傳導。ImDC上熒光主要位于胞漿，LPS刺激后，胞核