重復10次的Aβ3-10基因重組腺病毒疫苗免疫BALB-c鼠的脾細胞增殖反應研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　 眾多研究證據(jù)表明β淀粉樣蛋白(Aβ)在阿爾茨海默病(AD)的發(fā)病中起始動作用,這促使以產(chǎn)生Aβ抗體來減少腦內Aβ沉積的AD免疫治療策略的產(chǎn)生。在AD的主動免疫和被動免疫的基礎研究中,免疫治療可以減少腦內Aβ沉積,并改善實驗動物認知障礙;AN1792疫苗的臨床Ⅱ期試驗因約6%的患者出現(xiàn)嚴重腦炎而被迫中止,但在以后多年的觀察中,產(chǎn)生抗體的患者認知能力有一定改善,幾例尸檢報告患者腦內老年斑減少。相關研究提示T淋

2、巴細胞介導的針對Aβ42的自身免疫反應與腦炎的發(fā)生有關,因此第二代AD疫苗的研究重點是避免細胞免疫的同時有效誘導體液免疫。Aβ1-42的C末端含有T細胞抗原決定簇,可以激活與炎癥相關的T細胞反應,而N末端片段則含B細胞抗原決定簇,不誘發(fā)炎癥反應。基因技術的發(fā)展使得AD基因免疫治療成為可能,因此我們成功構建了10×Aβ3-10基因重組腺病毒疫苗,本實驗探索其在BALB/c鼠體內產(chǎn)生的炎癥免疫反應類型。
　　 方法:
　　

3、14只3月齡雄性小鼠按隨機數(shù)字表法分為目的基因組、空載體組、Aβ42組,分別用Ad-10×Aβ3-10-CpG、空腺病毒載體和Aβ42多肽和完全弗氏佐劑(CFA)的混合物進行免疫接種,每2周免疫一次,共免疫6次;免疫結束后殺鼠,取鼠脾細胞,加入刺激抗原ConA、Aβ3-10和Aβ42后,進行脾細胞體外培養(yǎng),用MTT法檢測各組脾細胞增殖率,同時留取脾細胞培養(yǎng)上清,ELISA法檢測脾細胞培養(yǎng)上清中細胞因子IL-4和IFN-γ的水平。

4、　　 結果:
　　 脾細胞增殖反應結果:三組均在ConA刺激時有最高的脾細胞增殖率;目的基因組和Aβ42組均在各自相應抗原重新刺激時表現(xiàn)出較高的脾細胞增殖率,即目的基因組在Aβ3-10多肽重刺激時脾細胞增殖率較高(1.71±0.31),而Aβ42組則在Aβ42重刺激時脾細胞增殖率較高(1.97±0.29);
　　 脾細胞培養(yǎng)上清中細胞因子檢測結果:在與三種刺激抗原相對應的Aβ42組的脾細胞培養(yǎng)上清中,IL-4和IFN-

5、γ水平均高于空載體組;在對應各自相應刺激抗原的培養(yǎng)上清中,目的基因組IL-4水平(84.48±6.02pg/m)與Aβ42組(90.02±7.72pg/m)相比差異無統(tǒng)計學意義,但IFN-γ水平(482.7±55.14pg/m)顯著低于Aβ42組(836.14±61.17pg/m)(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 本研究中目的基因組(Ad-10×Aβ3-10-CpG組)的脾細胞培養(yǎng)上清中細胞因子以IL-4為主,IF