大鼠糖尿病早期腎小管鈉—?dú)浣粨Q體3亞型表達(dá)的變化.pdf

1、目的：觀察大鼠糖尿病(diabetes mellitus，DM)早期腎小管鈉-氫交換體3亞型(Sodium hydrogen exchanger type3，NHE3)表達(dá)的變化，探討大鼠糖尿病早期腎臟NHE3蛋白變化與糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)的關(guān)系。 方法：成年健康雄性SD大鼠腹腔單次注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)60mg/kg，48h后尾靜脈取血，葡萄糖氧化酶法測(cè)定

2、血糖。設(shè)正常對(duì)照組和糖尿病模型組，置代謝籠內(nèi)監(jiān)測(cè)日飲水量、24h尿量變化；分別于STZ注射后2天、1周、2周、3周、4周取兩腎，一腎用于HE染色觀察腎臟組織病理學(xué)變化、免疫組織化學(xué)過(guò)氧化物酶連接法及圖象分析方法測(cè)定腎內(nèi)NHE3蛋白的定位和表達(dá)；另一腎迅速置液氮罐中2～3min后，轉(zhuǎn)置-80℃深低溫冰箱保存，用差速離心法制備腎小管刷狀緣膜(Brush-Border Membrane Vesicle，BBMv)，Bradford法測(cè)定蛋白濃

3、度后行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測(cè)，Western blot鑒定NHE3蛋白并應(yīng)用圖象分析進(jìn)行NHE3定量。 結(jié)果：1、雄性SD大鼠在禁食12h后一次性腹腔注射STZ，48h后測(cè)血糖≥16.7mmol/L，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)血糖仍在建模時(shí)的高水平波動(dòng)，未見(jiàn)自發(fā)緩解，且大鼠出現(xiàn)三多癥狀(多食、多飲、多尿)，精神萎靡、毛色晦暗、行動(dòng)遲緩、體重減輕或增長(zhǎng)緩慢，DM大鼠模型成功建立。2、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：糖尿病模

4、型組自2周NHE3蛋白在近端小管和髓袢部呈明顯陽(yáng)性，表達(dá)開(kāi)始升高，灰度值評(píng)分開(kāi)始降低(染色開(kāi)始加深)，與正常對(duì)照組、2天組、1周組表達(dá)量相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(180.03±11.35，p<0.05)；3周組、4周組與正常對(duì)照組、2天組、1周組、2周組的表達(dá)量相比差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(147.35±10.65，129.58±11.61，p<0.01)。3、Westem blot結(jié)果顯示：糖尿病模型組第3、4周腎皮質(zhì)腎小管刷狀緣膜的NHE