幼齡糖尿病大鼠早期腎小管葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2的表達(dá)研究.pdf

1、目的：觀察幼齡糖尿病大鼠各組早期腎小管葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLUT2)的表達(dá)規(guī)律，探討GLUT2表達(dá)和糖尿病腎病(DN)之間的關(guān)系。
　　方法：出生后3周健康雄性SD幼齡大鼠50只隨機(jī)分成正常組和糖尿病模型組，禁食12小時(shí)后，糖尿病組腹腔一次性注射20mg/kg的STZ，對照組采用同等體積的枸櫞酸緩沖液注射，48小時(shí)后，采集兩組大鼠鼠尾靜脈血，微量血糖儀測血糖，代謝籠中收集的大鼠尿用尿糖試紙檢測尿糖，以血糖≥16.65mmol/L或

2、尿糖出現(xiàn)+++或以上，符合二者之一為糖尿病大鼠造模成功，實(shí)驗(yàn)期間不給予胰島素及其他任何降糖藥物。在代謝籠中密切觀察并記錄兩組大鼠的日飲水量和24小時(shí)尿量情況。代謝籠內(nèi)監(jiān)測日飲水量、24h尿量變化。正常組和STZ注射后的lW組、2W組、4W組、6W組，至造模成功后稱大鼠體重、血糖、血肌酐、血尿素氮等指標(biāo)，取兩腎并觀察大體特征和稱取腎重量；其中一腎用于觀察腎臟組織病理學(xué)變化、免疫組化法測定腎內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2的表達(dá)規(guī)律；液氮保存固定另一腎2

3、～3min后，放入－80℃冰箱內(nèi)保存，BCA法測定腎小管刷狀緣膜的蛋白濃度，Western blot檢測GLUT2的表達(dá)，同時(shí)應(yīng)用圖像分析儀對各組GLUT2的灰度值進(jìn)行分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)研究。
　　結(jié)果：
　　l、幼齡大鼠的DM模型建立成功：各組血糖值均≥16.7mmol∕L，尿糖試紙定性檢測尿糖水平在＋＋＋或以上，隨時(shí)間進(jìn)展糖尿病模型各組糖尿病癥狀逐漸明顯。模型各組的尿微量白蛋白、血肌酐、血尿素氮等比正常組顯著增加。
　　

4、2、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：GLUT2主要在腎小管上表達(dá)，DM組腎小管GLUT2蛋白表達(dá)較對照組顯著升高。糖尿病模型自1W組開始GLUT2蛋白在腎小管陽性表達(dá)，表達(dá)量逐漸增高，和1W組、2W組比，在糖尿病6W組時(shí)腎小管GLUT2的表達(dá)量最高，差異有顯著意義；1W組、2W組和4W組、6W組的腎GLUT2表達(dá)量相比，4W組、6W組糖尿病大鼠腎 GLUT2表達(dá)量顯著性增加；分別比較1W組與2W組、4W組與6W組的GLUT2蛋白表達(dá)量相比，腎