體外培養(yǎng)小鼠微量圓形精子細(xì)胞冷凍保存研究.pdf

1、第一部分體外培養(yǎng)小鼠微量圓形精子細(xì)胞冷凍保存方法研究
　　目的:探討體外培養(yǎng)微量小鼠圓形精子細(xì)胞的最佳冷凍方法和冷凍條件。方法:采用玻璃化冷凍和常規(guī)慢冷凍分別在不同濃度甘油(5％、7%、11%)及不同平衡時間(0、15、30、45、60min)條件下對體外培養(yǎng)所獲微量小鼠圓形精子細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存。結(jié)果:(1)玻璃化冷凍和常規(guī)慢冷凍在7%甘油中平衡時間30min均可獲得最佳復(fù)蘇率;(2)在最佳冷凍條件下,玻璃化冷凍小鼠圓形精子細(xì)胞的

2、復(fù)蘇率顯著高于常規(guī)慢冷凍方法(P<0.05)。結(jié)論:采用玻璃化冷凍方法,在7%濃度的甘油保護(hù)劑中平衡30min行微量小鼠圓形精子細(xì)胞冷凍,可獲得較滿意的細(xì)胞復(fù)蘇率。
　　第二部分凍融體外培養(yǎng)小鼠圓形精子細(xì)胞在體外受精中的應(yīng)用價值
　　目的:探討凍融體外培養(yǎng)小鼠圓形精子細(xì)胞在體外受精中的應(yīng)用價值。方法:對玻璃化冷凍復(fù)蘇的體外培養(yǎng)小鼠圓形精子細(xì)胞標(biāo)記DAPI熒光染料,行小鼠卵泡漿內(nèi)顯微注射(ROSI)后觀察其受精和胚胎發(fā)育過程。