冷凍、獲能及鴿蛋LDL對豬精子細胞骨架完整性的影響.pdf

1、本試驗的主要目的是探索低溫和獲能對豬精子細胞骨架中兩種主要成分微管蛋白和肌動蛋白含量的影響，從分子生物學(xué)角度探究豬精子低溫冷凍保存后活率低下的原因，并利用鴿蛋中提取的低密度脂蛋白（LDL）代替?zhèn)鹘y(tǒng)的雞卵黃作為冷凍保護劑，研究其對豬精子細胞骨架完整性的保護作用。本試驗主要采用SDS-PAGE和Western Blot等試驗方法對低溫和獲能等不同處理的精子蛋白質(zhì)樣品進行分析，得到以下結(jié)果：
　　1.本試驗采用CM獲能液在恒溫培養(yǎng)箱中以

2、38℃，5％CO2條件下孵育四小時。對其蛋白質(zhì)樣品進行蛋白質(zhì)免疫印跡分析。結(jié)果表明豬精子獲能后微管蛋白的含量幾乎沒有發(fā)生變化，而肌動蛋白的含量略有下降。
　　2.對新鮮精子、獲能精子、低溫處理精子的蛋白進行 SDS-PAGE，試驗結(jié)果顯示，低溫保存后豬精子蛋白的種類和一些蛋白質(zhì)的含量發(fā)生了變化，而獲能后精子樣本與鮮精樣本基本沒有差異。
　　3.將豬精子在不同溫度（-80℃和-196℃）下進行冷凍24小時后對其蛋白質(zhì)樣本進行S

3、DS-PAGE和Western Blot分析。試驗結(jié)果表明：凍融后豬精子微管蛋白略有下降，而肌動蛋白的下降量十分顯著；-196℃的冷凍效果略好于-80℃。
　　4.用鴿蛋中提取的LDL代替?zhèn)鹘y(tǒng)的雞卵黃作為冷凍保護劑，不同溫度（-80℃和-196℃）下進行冷凍保存。將凍融后的精子樣本進行Western Blot分析。結(jié)果
　　表明：無論是-80℃還是-196℃，添加LDL后微管蛋白和肌動蛋白的含量均更接近鮮精樣本，且兩組間明顯