改性磷酸鈣納米基因載體的研究.pdf

1、由于具有低毒性、生物可降解性、易于使用和吸附DNA能力強(qiáng)等特點,磷酸鈣納米顆粒是目前廣泛應(yīng)用的非病毒載體之一,在許多哺乳動物細(xì)胞中進(jìn)行體外轉(zhuǎn)染取得了很好的效果。然而,傳統(tǒng)型磷酸鈣納米載體的轉(zhuǎn)染效果受到pH值、DNA和CaCl2濃度、溫度、細(xì)胞類型和沉淀時間等多種因素的影響,并且,相比陽離子脂質(zhì)體和其他多聚體來說,磷酸鈣轉(zhuǎn)染的可重復(fù)性差；磷酸鈣顆粒粒徑會隨著沉淀時間的延長而變大,從而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。
　　 在臨床試驗?zāi)Ｐ椭?陽離

2、子穿膜多肽能將生物小分子及一些物質(zhì)運(yùn)輸至大部分組織和細(xì)胞中。魚精蛋白是一種類似于穿膜多肽的富含精氨酸的小分子多肽。在研究中,發(fā)現(xiàn)魚精蛋白覆蓋在DNA/磷酸鈣復(fù)合顆粒的表面能起到穩(wěn)定顆粒粒徑大小的作用,基于此,我們開發(fā)了一種魚精蛋白修飾的新型磷酸鈣納米基因載體。
　　 為研究魚精蛋白涂層對魚精蛋白-磷酸鈣復(fù)合顆粒的粒徑及轉(zhuǎn)染效率的影響,我們采用pEGFP-C1增強(qiáng)型綠色熒光蛋白作為轉(zhuǎn)染效率的指示標(biāo)記,并以傳統(tǒng)型磷酸鈣納米基因載體作

3、為對照；采用原子力顯微鏡觀測顆粒的粒徑大小和形態(tài)；用細(xì)胞生長抑制試驗來測試載體對細(xì)胞的毒性作用。研究發(fā)現(xiàn),在293 FT,HEK293和NIH3T3細(xì)胞中,魚精蛋白-磷酸鈣復(fù)合顆粒的轉(zhuǎn)染效率明顯高于傳統(tǒng)型磷酸鈣納米顆粒。原子力顯微鏡檢測顯示魚精蛋白-磷酸鈣復(fù)合顆粒的粒徑明顯小于傳統(tǒng)磷酸鈣顆粒。轉(zhuǎn)染效率的差異可能與顆粒的粒徑大小有關(guān)。與傳統(tǒng)磷酸鈣載體相比,魚精蛋白-磷酸鈣復(fù)合顆粒的穩(wěn)定性明顯增強(qiáng),在4℃保存一周之后,轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,